[发明专利]一种水稻香味基因Aro2的功能性Indel分子标记引物A-2-1及其应用

权利要求书

1.一种水稻香味基因Aro2的功能性Indel分子标记引物A-2-1，其特征在于，所述分子标记引物的核苷酸序列为：

正向引物F：5’-AAACAGGATAGAACTGGCTAC-3’；

反向引物R：5’-CATTTACTGGGAGTTATGAAAC-3’；

所述引物进行PCR扩增，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，香型水稻扩增出长度211bp条带，非香型水稻扩增出219bp条带，杂合基因型水稻材料同时扩增出211bp和219bp条带；

所述211bp条带核苷酸序列如SeqIDNo.1所示；

所述219bp条带核苷酸序列如SeqIDNo.2所示。

2.权利要求1所述的一种水稻香味基因Aro2的功能性Indel分子标记引物A-2-1在香型水稻材料的鉴定和/或其后代香味基因型选择育种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述分子标记引物A-2-1在香型水稻材料的鉴定包括如下步骤：

步骤1，选取香型水稻材料和非香水稻材料；

步骤2，提取步骤1所选取材料的DNA；

步骤3，采用所述Indel标记引物对DNA进行PCR扩增；

步骤4，对扩增结果进行凝胶电泳检测；

步骤5，从电泳检测结果中筛选出现与水稻香味基因Aro2的Indel标记特征条带一致的材料，其中香型水稻材料扩增出长度211bp条带，非香型对照材料扩增出219bp条带。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增包括：

25μL的PCR反应体系为：100ng/μL的DNA模板2μL，10μmol的正向引物1.25μL，10μmol的反向引物1.25μL，2.5mM/μL的dNTPs2μL，+Mg²⁺的10×Buffer2.5μL，5u/μL的Taq酶0.25μL，双蒸水15.75μL；

PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤4具体为：按照每板30mL6％丙烯酰胺胶+0.3mL10％过硫酸铵+14μLTEMD的用量配制胶液；按5μL的量依次点入加了loadingbuffer之后的PCR产物；400V电泳2小时；采用0.1％AgNO₃溶液染色。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述分子标记引物A-2-1在香型水稻后代香味基因型选择育种中的应用具体包括如下步骤：

步骤1，选择香型与非香型水稻材料，进行杂交并自交产生后代；

步骤2，提取步骤1所选取材料及后代的DNA；

步骤3，采用分子标记引物A-2-1对DNA进行PCR扩增；

步骤4，对扩增结果进行凝胶电泳检测；

步骤5，从电泳检测结果中筛选出现与水稻香味基因Aro2的Indel标记特征条带一致的材料，其中，香型水稻材料与纯合香味单株扩增出211bp条带，非香型水稻材料与非香型纯合单株扩增出219bp条带，杂合基因型单株同时扩增出211bp和219bp条带；

步骤6，从香型水稻材料与非香型水稻材料杂交后代选择引物A-2-1扩增出211bp条带的单株或株系，结合田间农艺性状表现、稻米品质分析，培育香型水稻新材料。