[发明专利]长柱重楼抗癌活性部位PFE-PT3的化学成分分离和鉴定方法

权利要求书

1.一种长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3的化学成分分离鉴定方法，其特征在于从长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3分离得到重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、Pariposide A和β-蜕皮激素，步骤为：

(1)PFE-PT3的制备：长柱重楼Paris forrestii(Takht.)H.Li干燥根茎，粉碎后用95％乙醇13L浸泡7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将PFE-PT1用水2L制成混悬液，用乙酸乙酯2L×3萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位，乙酸乙酯萃取后的母液，继续用正丁醇2L×3萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PFE-PT3；

(2)PFE-PT3经硅胶柱层析用10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱划段，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C和Fr.D等4个部分；

(3)取Fr.B部分经C₁₈反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇-水，得到Fr.B₁、Fr.B₂、Fr.B₃、Fr.B₄、Fr.B₅和Fr.B₆等6个部分；

(4)取Fr.B₃部分，过LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱后，再用硅胶柱层析5:1的氯仿-甲醇洗脱得到β-蜕皮激素；

(5)取Fr.B₄部分，用半制备高效液相色谱纯化得到甲基原重楼皂苷I，和甲基原重楼皂苷V；

(6)取Fr.B₅部分，用半制备高效液相色谱纯化得到Pariposide A、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷I和重楼皂苷V；

(7)取Fr.B₆部分，半制备高效液相色谱纯化得到化合物PGRR和重楼皂苷H；

其中，(5)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB-C₁₈色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为甲醇-水，比例72:28，流速2mL/min；(6)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB-C₁₈色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为乙腈-水，比例50:50，流速2mL/min；(7)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB-C₁₈色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为乙腈-水，比例40:60，流速2mL/min。

2.根据权利要求1所述的一种长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3的化学成分分离鉴定方法，其特征在于该方法从PFE-PT3中分离得到10个化合物，通过质谱MS及核磁共振波谱NMR对其进行化学结构的确定。