[发明专利]一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法。

背景技术

甘胆酸是肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、胆石症伴黄疸患者胆管、胆囊排泄功能障碍、梗阻性肝病、肠—肝循环障碍都会引起甘胆酸升高。但目前所使用的关于甘胆酸测定试剂盒其准确性低，且操作复杂，不易推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=（990—1100）:（2—4）:（2—4）:（18—22）:（18—22）；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=（490—510）:（0.8—1.2）:（9—11）。

第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1000:3:3:20:20；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=500:1:10。

一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。

所述孵育时的温度均为37℃。

标准液中游离的甘胆酸与葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物竞争性结合抗甘胆酸特异性抗体位点。标准液中游离的甘胆酸越多，竞争结合的抗体位点越多，抗体释放出的酶标偶联物就越多。游离出来的甘胆酸酶标偶联物催化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD⁺）转化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH），标准液中甘胆酸浓度与NADH生成量成正比，通过NADH生成量从而判断甘胆酸的浓度。

本发明的有益效果是：一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。

具体实施方式

实施例1

一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1000:3:3:20:20；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=500:1:10。