[发明专利]核酸的检测方法

权利要求书

1.一种对样品中是否存在目标核酸进行检测的方法，所述目标核酸为目标DNA，所述方法包含如下步骤：

(1)提供第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白为拆分式信号发生蛋白N端片段与核酸酶缺陷型Cas9蛋白的融合蛋白，所述第二融合蛋白为拆分式信号发生蛋白C端片段与核酸酶缺陷型Cas9蛋白的融合蛋白，由所述N端片段和所述C端片段构成的所述信号发生蛋白能够参与产生可检测信号的化学反应；

(2)针对所述目标DNA中的一对或多对的靶序列，设计并合成sgRNA对；

(3)将所述样品、步骤(1)提供的所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白、步骤(2)获得的各sgRNA对以及参与产生可检测信号的化学反应的其它反应物和/或催化剂共同孵育，生成可检测信号；以及

(4)对所述可检测信号进行测量。

2.一种对样品中是否存在目标核酸进行检测的方法，所述目标核酸为目标RNA，所述方法包含如下步骤：

(1′)提供第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中，所述第一融合蛋白为拆分式信号发生蛋白N端片段与核酸酶缺陷型Cas9蛋白的融合蛋白，所述第二融合蛋白为拆分式信号发生蛋白C端片段与核酸酶缺陷型Cas9蛋白的融合蛋白，由所述N端片段和所述C端片段构成的所述信号发生蛋白能够参与产生可检测信号的化学反应；

(2′)针对所述目标RNA所对应的目标DNA中的一对或多对的靶序列，设计并合成sgRNA对；

(3′)针对所述样品中的所述目标RNA，实施逆转录并获得所对应的目标DNA；

(4′)将步骤(3′)获得的目标DNA、步骤(1′)提供的所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白、步骤(2′)获得的各sgRNA对以及参与产生可检测信号的化学反应的其它反应物和/或催化剂共同孵育，生成可检测信号；以及

(5′)对所述可检测信号进行测量。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述样品为环境样品，例如为地下水、中水、海水、采矿废料的样品；或者，所述样品为生物样品，特别是来自受试者的样品，例如为选自于如下样品中的一种或多种：面颊拭子、血液、血清、血浆、痰、脑脊液流体、尿液、泪液、肺泡分离物、胸膜液、心包液、囊液、肿瘤组织、组织、活组织切片、唾液；或者，所述样品来自于食品、饮用水或饲料；和/或

其中，所述目标核酸为天然存在或人工合成的核酸，例如来自于动物、植物或微生物的遗传物质或转录产物，优选地，所述核酸为来自于微生物，特别是工业微生物或病原体的遗传物质或转录产物；和/或

其中，所述靶序列为所述目标核酸的特征序列，例如为转基因片段序列、在疾病中最常发生改变的分子的特征序列或种属特征序列，特别地，所述靶序列为结核杆菌的种属特征序列。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述样品为经过预处理的样品或未经预处理的样品；优选地，使用选自于如下的方法对所述样品进行预处理：离心、过滤、超声、匀浆化、加热、冷冻、解冻、机械处理和/或PCR；特别地，通过选自于由如下方法所组成的组中的等温扩增方法实施所述预处理：连接酶链反应、自持序列复制、链置换扩增、切口酶扩增反应、滚环扩增、环介导等温扩增、交叉引物恒温扩增、Q-β扩增系统和OneCutEventAmplificatioN。