[发明专利]耐受高浓度烟碱的基内苍白杆菌CGMCC No.10670及其应用

说明书

本发明提供了一种耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏编号为：CGMCC No.10670，保藏日期为2015年3月30日。此外，本发明还提供了利用保藏编号为：CGMCC No.10670的基内苍白杆菌降解烟碱并耐受高浓度的烟碱的应用方法。本发明CGMCC No.10670基内苍白杆菌一种分离的全新的菌株，该基内苍白杆菌能够耐受高浓度的烟碱，耐受浓度高达10g/L。该基内苍白杆菌能够有效的降解烟碱，解决高浓度烟碱废弃物中的烟碱降解。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及基内苍白杆菌新的菌株以及该菌株的应用。

背景技术

尼古丁，又叫烟碱[nicotine，1-methyl-2-(3-pyridyl-pyrrolidine)]，属于吡啶族生物碱，在烟草生物碱中烟碱是最主要生物碱。烟碱是一种中枢神经兴奋剂，吸食后使人产生生理和心理上的依赖性，是让人成瘾的物质。利用微生物处理来降解烟碱这种方法不会造成烟香的损失还可以改进烟气品质，可以提高烟叶资源的利用率，有研究开发价值，更可以有效降低尼古丁对人的健康的损害，减少烟草工业产生的大量的废弃物对生态环境的污染。因此其开发应用将具有巨大的发展潜力和应用前景。

Brown&Williamson烟草公司利用假单胞菌(Pseudomonas putid)对烟草中的烟碱进行降解，发现用假单胞杆菌菌液对白肋烟和烤烟的混合烟丝(1∶1)进行18h处理后，烟碱含量平均从2.0％降到了0.85％。此外，有大量的降解烟碱的微生物被分离出来，包括假单胞菌、中间苍白杆菌、阴沟肠杆菌、曲霉等。但是这些菌普遍受烟碱耐受性的影响，耐受烟碱的浓度多小于4g/L，高浓度烟碱的不耐受性影响了其在烟草预处理以及高浓度烟碱废水的处理领域的应用。为此，本发明旨在提供分离筛选一种全新的基内苍白杆菌新的菌株，并且提供该菌株降解烟碱的方法。

发明内容

本发明针对目前烟碱降解微生物效率不高，特别是用于降解烟碱的微生物不能够耐受高浓度的烟碱的现状，筛选具有较好的烟碱耐受性的烟碱降解菌基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)，以及，提供一种该菌株降解烟碱的方法。

本发明提供了一种耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)，其保藏编号为：CGMCC No.10670，保藏日期为2015年3月30日。

进一步的，CGMCC No.10670基内苍白杆菌(Ochrobactrum intermedium)是从青岛卷烟厂周围土壤中通过选择性培养基分离得到的。

其生物学特征如下：

该菌为革兰阴性杆菌，菌体细胞为短杆状，没有芽孢，在显微镜下观察菌体的大小为0.2～0.4μm×0.4～1.1μm。菌体细胞呈短杆状，排列不整齐。在LB固体培养基表面，菌体形成不透明的浅黄色小菌落，菌落干，边缘不整齐。

上述基内苍白杆菌菌株的经通用引物PCR获得16S rDNA序列与其它多株肠杆菌的16S rDNA序列有95％的相似性但是不同。

其中上述PCR的引物为fD1：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，

rP2：CGGCTACCTTGTTACGACTT。

进一步的，本发明还公开了耐受高浓度烟碱且具降解烟碱能力的基内苍白杆菌的应用方法，即，利用保藏编号为：CGMCC No.10670的基内苍白杆菌降解烟碱并耐受高浓度的烟碱。具体为：

保藏编号为：CGMCC No.10670的基内苍白杆菌能够在以烟碱作为碳源的培养基里快速生长并降解烟碱，