[发明专利]一种原代肝细胞体外复极性的方法在审
申请号: | 201510579427.6 | 申请日: | 2015-09-11 |
公开(公告)号: | CN105132359A | 公开(公告)日: | 2015-12-09 |
发明(设计)人: | 汪艳;杨金连 | 申请(专利权)人: | 南方医科大学南方医院 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人: | 马丽丽 |
地址: | 510000 广东省广州市白云*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 肝细胞 体外 极性 方法 | ||
1.一种原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,包括以下步骤:将原代肝细胞悬液通过灌注种植的方式种植于细胞培养池中,同时对原代肝细胞施加紧凑力,使单位体积细胞密度达到90%以上,之后用肝细胞表型无血清培养液进行灌注培养。
2.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植的方法为原代肝细胞悬液流经并滞留于细胞培养池中。
3.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植时原代肝细胞悬液的流速为0.02mL/h。
4.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注培养时肝细胞表型无血清培养液的流速为0.02~0.06mL/h。
5.根据权利要求4所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,肝细胞紧凑种植后,第1h内以0.02mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养,第2至4h内以0.02~0.03mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养,4h后以0.04~0.06mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养。
6.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植为循环灌注种植。
7.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,对原代肝细胞施加紧凑力的具体方法为:在普通倒置光学显微镜下通过眼科镊蠕动对原代肝细胞施加紧凑力。
8.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的培养方法,其特征在于:肝细胞的培养时间为12h以上。
9.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,原代肝细胞悬液的密度为4-6×106个/mL。
10.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,肝细胞表型无血清培养液包含基础培养基HepatoZYMESFM、2mML-谷氨酰胺、60μMHEPES、50μM地塞米松和1×青霉素/链霉素双抗。
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