[发明专利]一种原代肝细胞体外复极性的方法在审

专利信息
申请号: 201510579427.6 申请日: 2015-09-11
公开(公告)号: CN105132359A 公开(公告)日: 2015-12-09
发明(设计)人: 汪艳;杨金连 申请(专利权)人: 南方医科大学南方医院
主分类号: C12N5/071 分类号: C12N5/071
代理公司: 北京市盈科律师事务所 11344 代理人: 马丽丽
地址: 510000 广东省广州市白云*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 肝细胞 体外 极性 方法
【权利要求书】:

1.一种原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,包括以下步骤:将原代肝细胞悬液通过灌注种植的方式种植于细胞培养池中,同时对原代肝细胞施加紧凑力,使单位体积细胞密度达到90%以上,之后用肝细胞表型无血清培养液进行灌注培养。

2.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植的方法为原代肝细胞悬液流经并滞留于细胞培养池中。

3.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植时原代肝细胞悬液的流速为0.02mL/h。

4.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注培养时肝细胞表型无血清培养液的流速为0.02~0.06mL/h。

5.根据权利要求4所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,肝细胞紧凑种植后,第1h内以0.02mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养,第2至4h内以0.02~0.03mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养,4h后以0.04~0.06mL/h的流速对肝细胞进行灌注培养。

6.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,灌注种植为循环灌注种植。

7.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,对原代肝细胞施加紧凑力的具体方法为:在普通倒置光学显微镜下通过眼科镊蠕动对原代肝细胞施加紧凑力。

8.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的培养方法,其特征在于:肝细胞的培养时间为12h以上。

9.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,原代肝细胞悬液的密度为4-6×106个/mL。

10.根据权利要求1所述的原代肝细胞体外复极性的方法,其特征在于,肝细胞表型无血清培养液包含基础培养基HepatoZYMESFM、2mML-谷氨酰胺、60μMHEPES、50μM地塞米松和1×青霉素/链霉素双抗。

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