[发明专利]一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用。

背景技术

糖化血清蛋白（Glycosylated serum protein，GSP）是血清中各种蛋白质与葡萄糖发生缓慢的非酶促糖化反应的产物。测定糖化血清蛋白的浓度可以反映人体前2-3周内的平均血糖水平，而且不受当时血糖浓度的影响，是糖尿病患者血糖监控的良好指标。因此，糖化血清蛋白的测定在糖尿病的诊断、近期监控和疗效评价方面均具有重要的意义。

糖化血清蛋白的检测方法最初是使用放射标记技术、过硫代巴比吐酸法、亲和层析法等，但是由于以上的检测方法操作繁琐，测定结果准确性低，逐渐被其他检测方法所替代。随着对糖化血清蛋白检测方法的不断改进，目前，临床上糖化血清蛋白的检测方法主要为酮胺氧化酶法和硝基四氮唑蓝比色法（NBT）。

中国专利申请200710000822.X公开了一种糖化血清蛋白的酶法测定方法及液体稳定试剂，该酶法测定的原理是通过菠萝蛋白酶消化糖化血清蛋白产生果糖氨基酸，果糖氨基酸氧化酶作用于果糖氨基酸产生H₂O₂，H₂O₂在过氧化物酶的催化下与色原DA-64反应产生一种绿色的物质，从而达到检测糖化血清蛋白的目的。虽然上述的液体稳定试剂无需复溶，可以直接使用，而且反应后的产物污染性小。但是，该液体稳定试剂中酶的活性下降较快，试剂稳定性较差，检测结果容易受外界因素的干扰，导致检测结果重复性低。

中国专利CN103197084B公开了一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用，该检测试剂采用双试剂，将NBT储存在试剂R1的中性pH环境中从而解决了NBT在碱性环境中易析出，体系浑浊的问题，并且该检测试剂采用了新的非离子表面活性剂烷基糖苷 APG1214，可以显著改善测定性能，保证了试剂检测结果的准确度和稳定性，满足临床的需要。但是，该糖化血清蛋白检测试剂对pH值、反应时间和反应温度要求较高，线性相对较窄，容易受到血清中其他物质的干扰，且其反应后的生成物对仪器污染较大，大大的限制了该糖化血清蛋白检测试剂的应用。

鉴于目前糖化血清蛋白检测试剂存在的诸多缺陷，研究和发开出一种稳定性高，检测结果误差小，检测结果重复性高的糖化血清蛋白检测试剂是目前亟需解决的难题。

发明内容

为了克服现有技术中糖化血清蛋白检测试剂存在检测结果准确性差、重复性低，抗干扰能力低的缺陷，本发明的目的是提供一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用，以解决上述问题。

本发明提供了一种糖化血清蛋白检测试剂，该试剂包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括以下组分：

磷酸钾缓冲液10-30mmol/L、尿酸酶 2-10U/ml、抗坏血酸氧化酶8-20U/ml、烷基醇酰胺聚氧乙烯醚20-60mmol/L、多元醇5-10mg/ml、氯化钙25-45μmol/L和防腐剂0.1-1g/L；

所述试剂R2包括以下组分：

MES缓冲液0.1-2mmol/L、烷基聚葡萄糖苷30-80mmol/L、2-（4-碘苯）-3-（2,4-二硝基苯1）-5-（2,4-二磺基苯1）-2H-四氮唑0.1-1.5mmol/L和防腐剂0.1-1g/L。

进一步地，所述糖化血清蛋白检测试剂包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括以下组分：

磷酸钾缓冲液 20mmol/L、尿酸酶 6U/ml、抗坏血酸氧化酶12U/ml、烷基醇酰胺聚氧乙烯醚40mmol/L、多元醇6mg/ml、氯化钙35μmol/L和防腐剂0.2g/L；

所述试剂R2包括以下组分：

MES缓冲液1mmol/L、烷基聚葡萄糖苷45mmol/L、2-（4-碘苯）-3-（2,4-二硝基苯1）-5-（2,4-二磺基苯1）-2H-四氮唑0.5mmol/L和防腐剂0.2g/L。

进一步地，所述磷酸钾缓冲液的pH值为6.5-7.5，优选pH值为7.0。

进一步地，所述MES缓冲液的pH值为9.5-10.8，优选pH值为10.5。

进一步地，所述防腐剂为对羟基苯甲酸酯。

进一步地，所述多元醇为1,2-丙二醇或乙二醇。