[发明专利]猕猴桃AdADH1基因与应用在审
申请号: | 201510583489.4 | 申请日: | 2015-09-14 |
公开(公告)号: | CN105112381A | 公开(公告)日: | 2015-12-02 |
发明(设计)人: | 张计育;黄胜男;郭忠仁;宣继萍;贾晓东;王刚;翟敏;刘永芝 | 申请(专利权)人: | 江苏省中国科学院植物研究所 |
主分类号: | C12N9/04 | 分类号: | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/01 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 傅婷婷;徐冬涛 |
地址: | 210014 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 猕猴桃 adadh1 基因 应用 | ||
技术领域
本发明涉及植物基因工程领域,具体涉及猕猴桃AdADH1基因与应用。
背景技术
猕猴桃属于猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)落叶性藤本果树,全世界猕猴桃属植物有54个种21个变种,共约75个分类单位,种质资源极其丰富。1904年,新西兰从我国引种猕猴桃,人工驯化,开始品种选育工作和商业化生产。目前市场上栽培的主要品种大多选自于美味猕猴桃和中华猕猴桃,还有少量选自软枣猕猴桃。猕猴桃由于含有极其丰富的营养价值,尤其是Vc含量很高,被誉为“Vc之王”,所以越来越受到人们的青睐。
江苏省夏季雨季较长,雨水较多,给猕猴桃生长生产带来了严峻的挑战。2011年,由于雨季雨水较多,涝害严重,扬州市大量成年猕猴桃植株死亡,给果农造成了巨大的经济损失。因此,猕猴桃的耐涝问题是制约江苏省猕猴桃产业发展的主要因素之一。选育耐涝性砧木和品种资源无疑是解决该问题的主要途径。随着分子生物学及基因工程技术在果树领域的应用,应用基因工程技术手段来改造猕猴桃的抗性,是今后抗性研究的目标。因此,挖掘和研究猕猴桃耐涝基因将会为通过基因工程技术手段培育猕猴桃耐涝性砧木和品种资源奠定理论基础。
目前,有关植物耐涝基因筛选方面的研究较少,关于耐涝基因的表达与调控方面的研究更是微乎其微。猕猴桃品种‘金魁’是我国选育的美味猕猴桃品种之一,抗旱、耐涝、抗冻能力较强。在猕猴桃耐涝基因挖掘方面的研究还未见报道。因此克隆和研究猕猴桃抗逆相关基因,对于开发具有中国自主知识产权的果树抗逆基因具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述不足,提供一种猕猴桃AdADH1蛋白。
本发明的另一目的是提供该猕猴桃AdADH1蛋白的编码基因。
本发明的又一目的是提供该基因、蛋白的应用。
本发明的目的可通过如下技术方案实现:
本发明所提供的猕猴桃AdADH1蛋白,来源于猕猴桃优良品种‘金魁’,氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
本发明所述的猕猴桃AdADH1蛋白的编码基因,其cDNA序列如SEQIDNO.1所示,含有1143bp的最大开放阅读框,编码SEQIDNO.2所示的380个氨基酸残基序列。
含有本发明AdADH1蛋白的编码基因的表达载体,优选含有SEQIDNO.1所示的AdADH1蛋白的编码基因的表达载体。
所述的表达载体进一步优选将所述的猕猴桃AdADH1蛋白的编码基因插入到pCAMBIA1301载体的KpnⅠ和SacⅠ酶切位点间所得。
含有本发明AdADH1蛋白的编码基因的宿主菌。
所述的宿主菌优选将pCAMBIA1301-AdADH1转入的根癌农杆菌EHA105.
扩增AdADH1cDNA全长的引物为:
AdADH1-ORFsense:5'-GGAGTTTGTGAGAGAAGTTAGAG-3'
AdADH1-ORFantisense:5'-AGATTTCACCAGCAAACTCAC-3'
实时荧光定量RT-PCR分析中涉及的AdADH1的qPCR引物为:
AdADH1-qPCRsense:5'-TGGAGTGTACTGGAAGTGTCAATG-3'
AdADH1-qPCRantisense:5'-AGCAGGGAGGTCGGAACG-3'
上述猕猴桃AdADH1蛋白、其编码基因、含有编码基因的表达载体、含有该编码基因的宿主菌在培育耐涝、耐低温或耐盐植物中的应用。
有益效果:
本发明在金魁猕猴桃中克隆到一个AdADH1蛋白的编码基因,AdADH1参与猕猴桃耐涝、耐低温和耐盐胁迫过程。
AdADH1的编码基因在涝害胁迫、低温胁迫、和盐害胁迫诱导条件下表达。转基因拟南芥中过量表达AdADH1的编码基因,与对照组相比,转基因材料表现耐涝、耐盐和耐低温的特性。这一结果说明AdADH1的编码基因参与植物抵抗涝害、低温或盐害胁迫过程中起着非常重要的作用。
本发明的AdADH1的编码基因对于培育耐涝、耐低温、或耐盐植物品种或植物改良品种具有重要意义,在作物育种方面具有广泛的应用前景。
利用本发明的植物表达载体,将AdADH1的编码基因导入植物体内,可以获得耐涝、耐低温和耐盐的转基因植株。
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