[发明专利]一种蚜虫共生菌多重PCR检测的引物组和检测方法

权利要求书

1.一种蚜虫共生菌多重PCR检测的引物组，其特征在于，所述引物组是由检测沃尔巴克氏菌(Wolbachia pipientis)、杀雄菌属(Arsenophonus)和蚜虫U型共生菌(Regiella insecticola)的引物对组成；

所述检测沃尔巴克氏菌引物对的上下游引物的核苷酸序列为：

上游引物Wol-F：5'-ATAGCTGGTGGTGGTGCATT-3'(SEQIDNO.1)，

下游引物Wol-R：5'-TGCACCAACAGTGCTGTAAAC-3'(SEQIDNO.2)；

所述检测杀雄菌引物对的上下游引物的核苷酸序列为：

上游引物Ars-F：5'-AGCGCTATTTTCAACGGGTA-3'(SEQIDNO.3)，

下游引物Ars-R：5'-CGATTACTCGGTAGCGGTGT-3'(SEQIDNO.4)；

所述检测蚜虫U型共生菌引物对的上下游引物的核苷酸序列为：

上游引物Reg-F：5'-ACTGCTCCATCGTGGTTTTC-3'(SEQIDNO.5)，

下游引物Reg-R：5'-CCACGAAAAAGATGCCAAAT-3'(SEQIDNO.6)。

2.一种蚜虫共生菌多重PCR检测的方法，其特征在于，将权利要求1所述的引物组与待测蚜虫样品的总DNA进行多重PCR反应，反应结束后对PCR反应产物进行电泳分析，以确定蚜虫样品中是否含有蚜虫共生菌，具体包括以下步骤：(1)引物合成：合成权利要求1所述的引物组中的三种引物对；

(2)DNA模板提取：提取蚜虫样品的总DNA；

(3)多重PCR扩增反应：以步骤(2)提取得到的总DNA为模板，以权利要求1所述的引物组为引物，进行PCR扩增反应；

所述PCR扩增反应的反应体系为50μl：10×PCR Buffer5μl，2.5mM/L的dNTPs4μl，5U/μl的Taq DNA聚合酶0.5μl，10μm/L的wsp-F2.0μl，10μm/L的wsp-R2.0μl，10μm/L的Ars-F2.0μl，10μm/L的Ars-R2.0μl，10μm/L的Reg-F2.0μl，10μm/L的Reg-R2.0μl，DNA模板1μl，25mM/L的MgCl23μl，去离子水补至50μl；

PCR扩增反应的反应条件为：

a：94℃预变性4min；

b：94℃变性30s，

c：55℃退火30s，

d：72℃延伸30s，b-d循环35个反应；

e：72℃延伸10min；

(4)多重PCR产物分析：将步骤(3)中得到的多重PCR扩增产物进行电泳分析。

3.权利要求1所述的引物组在检测蚜虫样品共生菌感染情况中的应用。