[发明专利]一种黄藤组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种黄藤组织培养快繁方法。

背景技术

黄藤(Fibaurea recisa Pierre)别名土黄莲、黄莲藤，为防已科多年生藤本植物。以藤茎或根为主要药用部位，具有清热解毒、利尿通便、治疗饮食中毒、咽喉肿痛、霉菌性阴道炎等重要作用。随着相关制剂，如：黄藤分散片、复方黄藤洗剂、黄藤素片、黄藤素栓等的深入开发利用，对黄藤资源的需求也日益增加，但因少有黄藤人工栽培，药用黄藤主要靠采挖野生资源，以致其野生资源遭到毁灭性的破坏。

黄藤雌雄异株，为天然异花授粉植物，结实率易受环境影响，兼之种子成熟期长，不易长期保存，否则容易丧失活力，因此，自然状态下黄藤种子的数量和质量缺乏保证；且种子苗遗传背景杂合，不能完全代表母株的遗传特性，后代植株差异不齐。无性繁殖具有保持亲本遗传性状的优点，但黄藤无性繁殖只有扦插相关的研究报道，且尚无明确的成苗情况和繁殖效率比较研究(闫志刚等.吲哚丁酸和萘乙酸对黄藤插穗生根的影响.时珍国医国药,2008(19):2)。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄藤组织培养快繁方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良黄藤种苗、满足生产需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种黄藤组织培养快繁方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取黄藤健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，去除叶片，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，

(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加了0.1-0.5mg/L吲哚乙酸IAA、0.5-0.1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，

(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加0.5-1.0mg/L的萘乙酸NAA、30g/L的香蕉泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，

(6)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温下炼苗4-7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。

本发明的突出优点在于：

(1)采用本发明所述的培养方法得到的黄藤丛生芽增殖系数达到30-40倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达95％以上。

(2)采用组织培养的方法能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的黄藤幼苗，保障黄藤种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的黄藤的组织培养快繁方法的一个实例，包括以下步骤：