[发明专利]一种含有外周血干细胞的生物制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，尤其涉及一种含有外周血干细胞的生物制剂及其制备方法和应用。

背景技术

心肌梗塞是心肌的缺血性坏死，是在冠状动脉病变的基础上，引发冠状动脉供血急剧减少或中断，使相应的心肌严重而持久的急性缺血所致。在临床上常表现为胸痛、急性循环功能障碍，血清心肌酶增高，以及反应心肌急性缺血、损伤和坏死的一系列特征性的心电图演变。可发生心律失常、休克或心力衰竭，是冠心病的严重类型。

心肌梗塞发病时，心肌细胞持续凋亡，使心肌细胞进行性丢失，胶原支架断裂，室壁变薄，从而导致可做功的心肌细胞减少，最终发展为心力衰竭。因此，如何促进梗死区心肌细胞再生，抑制心肌细胞凋亡，是治疗心肌梗塞的关键。但是，目前所用的心肌梗塞治疗手段，如溶栓、植入支架等都仅能恢复血流在心肌区域的再灌入，防止心肌梗塞面积的扩大，并不能逆转已坏死的心肌细胞，因此达到的治理效果极其有限。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种含有外周血干细胞的生物制剂及其制备方法和应用，本发明提供的生物制剂对心肌梗塞具有较好的治疗效果。

本发明提供了一种含有外周血干细胞的生物制剂，包括外周血干细胞、碱性成纤维细胞因子、基质细胞衍生因子和溶剂。

优选的，所述外周血干细胞在所述生物制剂中的含量为10⁶～10¹⁰个/mL。

优选的，所述碱性成纤维细胞因子在所述生物制剂中的含量为1～30ng/mL。

优选的，所述基质细胞衍生因子在所述生物制剂中的含量为1～30ng/mL。

优选的，所述溶剂为生理盐水。

本发明提供了一种含有外周血干细胞的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：

a)、外周血干细胞、碱性成纤维细胞因子、基质细胞衍生因子和溶剂混合，得到含有外周血干细胞的生物制剂。

优选的，所述步骤a)具体为：

a1)、碱性成纤维细胞因子、基质细胞衍生因子和溶剂混合，得到混合液；

a2)、所述混合液和外周血干细胞混合，得到含有外周血干细胞的生物制剂。

优选的，所述外周血干细胞通过以下步骤获得：

b1)、外周血进行离心分离，得到外周血单个核细胞；

b2)、培养所述外周血单个核细胞，得到外周血干细胞。

优选的，所述步骤b2)具体为：

传代培养所述外周血单个核细胞至P3～P5代，得到外周血干细胞。

本发明提供了一种上述技术方案所述生物制剂或上述技术方案所述方法制得的生物制剂在制备治疗心肌梗塞药物的应用。

与现有技术相比，本发明提供了一种含有外周血干细胞的生物制剂及其制备方法和应用。本发明提供的生物制剂包括外周血干细胞、碱性成纤维细胞因子、基质细胞衍生因子和溶剂。本发明提供的生物制剂含有外周血干细胞、碱性成纤维细胞因子和基质细胞衍生因子，通过三者的协同作用，能够改善心肌功能，激发心脏残存细胞的生存潜能，逆转坏死心肌细胞，修复心脏，从而实现对心肌梗塞的有效治疗。实验结果表明，采用本发明提供的生物制剂注射治疗心肌梗塞的大鼠(梗塞心肌面积占心室面积比例为35.67±10.75％，梗塞心肌重量占心肌重量比例为26.89±8.53％)时，治疗后大鼠的梗塞心肌面积占心室面积比例小于22.89±8.43％，梗塞心肌重量占心肌重量比例小于17.42±5.61％，显示出良好的治理效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例7提供的外周血干细胞在40倍下观察到的细胞形态；

图2是本发明实施例7提供的外周血干细胞在100倍下观察到的细胞形态；

图3是本发明实施例7提供的外周血干细胞活力检测图；

图4是本实施7提供的外周血干细胞的FSC-A(forwardscatter-area)图；

图5是本实施7提供的外周血干细胞的CD73-A(CD73单克隆抗体-area)图；

图6是本实施7提供的外周血干细胞的CD45-A(CD45单克隆抗体-area)图；

图7是本实施7提供的外周血干细胞的HLA-DR-A(HLA-DR单克隆抗体-area)图；