[发明专利]一种藻体中腐殖酸的分级提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及腐殖酸分离提取技术，具体涉及一种藻体中腐殖酸的分级提取方法。

背景技术

腐殖酸（humic acid）是一种广泛存在于土壤、水体、沉积物等环境介质中的大分子有机混合物。腐殖酸能溶于碱性和中性溶液，不溶于酸。腐殖酸中含有大量活性官能团如羧基、酚羟基、羰基、氨基和巯基，从而具有很高的反应活性。例如在天然环境中，能与环境中的有毒重金属离子和有机污染物（如农药，PPCPs和PAHs）发生相互作用，形成化学和生物稳定性的溶于水和不溶于水的物质，从而改变其迁移、转化规律和生物有效性。

一般认为，腐殖酸是由动植物及其残体经过复杂的物理、化学、生物过程形成的，但大量研究表明海洋藻体中含有一定量的腐殖酸。活体生物中，特别是藻体中腐殖酸的提取对研究腐殖酸来源和归趋具有重要意义。现代仪器分析技术的发展，为腐殖质的研究提供了先进的手段， 取得大量突破性创新。人们已经熟知腐殖酸元素组成，光谱特征等基本理化性质。但是由于腐殖酸的组成和结构及其复杂，它的元素组成、分子量、芳香度及官能团含量等结构随着时空不同而发生变化，因此成功分离腐殖酸及其亚组分具有重要的环境学意义。然而藻体腐殖酸的分级分离尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种藻体中腐殖酸的分级提取方法，该方法能够克服现有技术对腐殖酸分级提取过程的不足，获得腐殖酸各级亚组分。

为实现上述目的，本发明公开了一种藻体中腐殖酸的分级提取方法，所述分级提取方法包括如下步骤：

步骤a、藻体预处理：

取风干后的藻体剔除杂物，下烘干碾磨后过筛，得到藻体粉末；

步骤b、藻体索氏提取：

将藻体粉末置于索式提取器中，依次用乙醚、丙酮、95%乙醇、二氧杂环己烷和去离子水为提取液进行索氏提取，所得固体标记为索提藻体；

步骤c、藻体氯化钙及酸洗：

用氯化钙溶液连续三次提取索提藻体，每次提取时固液比为1：10，在40-60^oC条件下连续搅拌15-30 min后，离心所得固体标记为氯化钙处理藻体；

用盐酸连续三次提取氯化钙处理藻体，每次提取时固液比为1：10，连续搅拌10-30 min后，离心所得固体标记为盐酸处理藻体；

向盐酸处理藻体中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10-30 min后，离心所得固体标记为水洗盐酸处理藻体；

步骤d、藻体碳酸钠处理：

用碳酸钠溶液连续三次提取水洗盐酸处理藻体，每次提取固液比为1：10，在30-45^oC条件下连续搅拌30-60 min后，离心所得固体标记为碳酸钠处理藻体；

向碳酸钠处理藻体中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10 -30 min后，离心所得固体标记为水洗碳酸钠处理藻体；

步骤e、藻体碱液提取：

向水洗碳酸钠处理藻体中加入去离子水，使溶液固液比达到1:3，用盐酸和氢氧化钠调节溶液pH值=6.0-8.0，在氮气保护下，向溶液中加入焦磷酸钠溶液，使溶液固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1 mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6 h，静置20-28 h后，离心分离，得到上层清液1及固体焦磷酸钠提取藻体1；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体1中加入焦磷酸钠溶液，使溶液固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1 mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6 h，静置20-28 h后，离心分离，得到上层清液2及固体焦磷酸钠提取藻体2；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体2中加入焦磷酸钠溶液，使溶液固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1 mol/L，然后将溶液连续搅拌4 -6 h，静置20-28 h后，离心分离，得到上层清液3及固体焦磷酸钠提取藻体3；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体3中加入去离子水，使溶液固液比达到1:5，用盐酸和氢氧化钠调节溶液pH值=6.0-8.0，向溶液中加入氢氧化钠溶液，使溶液固液比为1:10且氢氧化钠浓度为0.1 mol/L，然后将溶液连续搅拌4 -6 h，静置20-28 h后，离心分离，得到上层清液4及固体氢氧化钠提取藻体1；

在氮气保护下，向氢氧化钠提取藻体1中加入氢氧化钠溶液，使溶液固液比为1:10且氢氧化钠浓度为0.1 mol/L，然后将溶液连续搅拌4 -6 h，静置20-28 h后，离心分离，得到上层清液5及固体氢氧化钠提取藻体2；