[发明专利]一种水体中富里酸亚组分的分级提取方法

权利要求书

1.一种水体中富里酸亚组分的分级提取方法，其特征在于，所述分级提取方法包括如下步骤：

步骤a：水样酸化及过滤：

用碱和酸调节水体样品pH=0.5-1.5，用滤膜过滤，所得滤液标记为已滤水体样品；

步骤b：水体富里酸的树脂吸附：

将已滤水体样品以10-15倍柱体积/h的流速通过树脂柱，弃去流出液；

步骤c：富里酸亚组分分级淋洗：

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=2的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=2的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分1；；

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=3的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=3的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分2；

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=4的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=4的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分3；

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=5的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=5的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分4；

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=6的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=6的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分5；

以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=7的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=7的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分6；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=8的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=8的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分7；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=9的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=9的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分8；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=10的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=10的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分9；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=11的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=11的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分10；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=12的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=12的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分11；

氮气保护下，以5-10倍柱体积/h的流速，用pH=13的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗树脂柱，每收集2-50ml流出液，用特定波长紫外/可见光进行测定，流出液的紫外/可见吸光值先增大后减小，当流出液紫外/可见吸光值小于最大吸光值的0.5%时，停止pH=13的焦磷酸钠缓冲溶液淋洗过程，合并流出液，立即酸化至pH=1，搅拌4h后，静置24h，离心得到上清液，标记为富里酸亚组分12；

步骤d：富里酸亚组分纯化：

向富里酸亚组分1至富里酸亚组分12，共计12份溶液中，分别加入氢氟酸，使溶液中氢氟酸浓度为0.3mol/L，持续搅拌4h，并静置24h后，离心得到12份上清液，分别标记为纯化富里酸亚组分1至纯化富里酸亚组分12；

步骤e：水体富里酸亚组分除盐及固化：

将纯化富里酸亚组分1至纯化富里酸亚组分12，共计12份溶液分别以3-5倍柱体积/h的流速通过树脂柱，弃去流出液；

每份纯化富里酸亚组分在树脂柱上吸附完成后，则分别用0.65倍柱体积去离子水以10-15倍柱体积/h的流速，冲洗树脂柱，弃去流出液；然后用1倍柱体积0.1mol/L氢氧化钠溶液和2倍柱体积去离子水以3-5倍柱体积/h的流速依次淋洗树脂柱，收集流出液；再将收集的流出液通过氢离子饱和的氢型阳离子交换树脂进行交换，最终得到的流出液即为无盐富里酸亚组分；

依次操作，将每份纯化富里酸亚组分得到的无盐富里酸亚组分分别标记为无盐富里酸亚组分1至无盐富里酸亚组分12；

然后再将无盐富里酸亚组分1至无盐富里酸亚组分12分别冷冻干燥，最终得到12份固态富里酸亚组分分级样品，分别标记为固态富里酸亚组分1至固态富里酸亚组分12。