[发明专利]一种免疫磁微粒化学发光法HCMV IE1抗原检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属免疫检测分析技术领域，尤其涉及一种免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒。

背景技术

人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus，HCMV)属于人类疱疹病毒β亚科病毒，在人群中的感染极为普遍，呈世界性分布。在我国血清流行病学调查显示，40～100％成人有HCMV抗体。目前的研究表明HCMV是人类先天性感染最常见的病原体之一，对孕妇及胎儿影响巨大，常造成流产、死胎、胎儿畸形、发育迟缓及迟发性中枢神经系统缺陷等疾病。研究发现在发达国家先天性HCMV感染率比发展中国家要低：意大利为0.47％(CI:0.22–1.0％)；瑞典为0.46％(CI:0.37–0.58％)；冈比亚HCMV的先天性感染率高达13.6％。美国对HCMV先天性感染及影响做过详细的研究，其先天性感染率为1％，每年约40000新生儿伴有先天性HCMV感染，其中10％～15％发生迟发性后遗症，主要为迟发性耳聋(SNHL)、智力障碍、学习能力低下等神经系统损伤性疾病，其中因SNHL每年付出高达10亿美元的医疗帐单。目前我国还没有HCMV先天性感染率的详实流行病学调查结果。但2011年我国出生人口约1615万，以美国先天性HCMV感染率来计算，则我国2011年约有16.2万新生儿患先天性HCMV感染。家庭和国家都将为此支出高昂的成本。实际上，据现有的研究结果显示，我国先天性HCMV感染新生儿是16.2万人/年的2-3倍。由于先天性HCMV感染难以于产前确诊，迟发性后遗症如SNHL与新生儿听力筛查存在时间上的错位，难以早期发现。目前的研究还显示，尽早对先天性HCMV感染的患儿进行抗病毒治疗可以挽救听力。因此，承待建立临床简便易行且高度特异性的方法进行新生儿先天性感染的早期确诊。

病毒分离是诊断先天性HCMV感染的“金标准”。但传统的病毒分离方法需要半个月左右才能判定结果，费用昂贵，而且需要经过特殊训练的专业人员才可以胜任，ELISA方法虽然获得结果迅速，但是存在自动化程度不高等弊端。新近出现的将病毒分离与IE1抗体间接免疫荧光相结合的方法虽能在24h左右获得结果，但无法实现高通量和标准化检测。IE1基因是HCMV的立即早期基因，由HCMVUL122-UL123基因编码，它在病毒感染2h即开始表达，控制HCMVDNA的复制起始。现已证实是新生儿排毒的主要途径之一，其中HCMV的检出率与尿液相同。因此，我们制备了基于双抗体夹心和化学发光原理的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，可以准确筛查新生儿先天性HCMV感染，其检测结果与病毒分离和PCR检测高度一致。

发明内容

本发明的目的是：针对现有HCMV先天性感染测技术的不足，提供一种无创性免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，用于HCMV先天性感染检测。一种免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，包括偶联有抗HCMVIE1单克隆抗体的磁微粒混悬液、标准品、辣根过氧化物酶标记的抗HCMVIE1多克隆抗体应用液、化学发光底物液、样品稀释液和洗涤液。

所述的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，将HCMVIE1单克隆抗体包被在磁珠微球表面，捕捉样本中的IE1抗原再与加入的酶标HCMVIE1多克隆抗体形成磁微粒-抗体-抗原-酶标抗体夹心免疫复合物，催化酶促化学发光底物发光。

所述的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有抗HCMVIE1单克隆抗体的磁微粒混悬液为含1g/L包被有抗体磁微粒的0.1MpH7.6PBS缓冲液；所述HCMVIE1单克隆抗体包括轻链和重链，轻链的氨基酸的序列如序列表SEQNo1.所示；所述重链的氨基酸的序列如序列表中SEQNo2.所示。

所述的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，所述的磁微粒表面的活性基团为羧基。

所述的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，包被磁微粒的抗体为HCMVIE1单克隆抗体，产生抗IE1单克隆抗体的杂交瘤编号为D94/D95，单克隆抗体可变区氨基酸序列如序列表SEQNo1.所示。

所述的免疫磁微粒化学发光法HCMVIE1抗原检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的抗HCMVIE1多克隆抗体应用液，为含1:8000稀释的辣根过氧化物酶标记兔免疫血清的0.1MpH7.6PBS缓冲液。