[发明专利]一种AaTSW2基因启动子及其应用与制备方法有效
申请号: | 201510586763.3 | 申请日: | 2015-09-15 |
公开(公告)号: | CN105112421B | 公开(公告)日: | 2017-12-29 |
发明(设计)人: | 唐克轩;陈明慧;颜廷祥;付雪晴;石璞;马亚男;郝小龙;孙小芬 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00 |
代理公司: | 上海旭诚知识产权代理有限公司31220 | 代理人: | 郑立 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 aatsw2 基因 启动子 及其 应用 制备 方法 | ||
1.一种启动子,其特征在于,所述启动子为AaTSW2基因启动子,所述启动子的核苷酸序列如序列表中序列1所示。
2.含有权利要求1所述启动子的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。
3.根据权利要求2所述的表达盒,其特征在于,所述表达盒由权利要求1所述的启动子、由权利要求1所述的启动子启动转录的目的基因和终止子组成。
4.根据权利要求2所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌为经pCAMBIA1391Z-AaTSW2载体转化的根癌农杆菌。
5.根据权利要求1所述的启动子在利用青蒿腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中的应用。
6.根据权利要求5所述的启动子在利用青蒿腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中的应用,其特征在于,所述代谢产物为青蒿素。
7.一种根据权利要求1所述的启动子的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
步骤一、培养青蒿无菌苗;
步骤二、使用PCR技术克隆启动子基因组序列PAaTSW2;扩增所述PAaTSW2基因启动子的引物为:
上游引物-AGAATAACCCCTTACCTTTTTGT
下游引物-GGAGAGAGAAAAAAGATGTAGAAACG;
步骤三、分析所述启动子上的顺式作用元件,确定AaTSW2基因启动子的类型;
步骤四、将所述AaTSW2基因启动子连入pCAMBIA1391Z载体;扩增所述AaTSW2基因启动子的引物为:
上游引物-CCCTGCAGAGAATAACCCCTTACCTTTTTGT
下游引物-CCGGATCCGGAGAGAGAAAAAAGATGTAGAAACG;
步骤五、将构建好的载体pCAMBIA1391Z-AaTSW2载体转化根癌农杆菌;
步骤六、将带有所述pCAMBIA1391Z-AaTSW2载体的所述根癌农杆菌转化青蒿;
步骤七、使用PCR技术检测步骤六中获得的转基因植株;
步骤八、确定启动子所引导的gus报告基因在植株中的表达部位。
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