[发明专利]一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂在审
申请号: | 201510589632.0 | 申请日: | 2015-09-16 |
公开(公告)号: | CN105087549A | 公开(公告)日: | 2015-11-25 |
发明(设计)人: | 李纯锦;周虚;陈璐;陈树雄;蒋彦文;高珊;赵云;刘卓;李洪蛟 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 赵青朵 |
地址: | 130012 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 同时 高效 提取 rna dna 方法 试剂 | ||
1.一种RNA提取试剂,其特征在于,包括如下组分:
BufferA:盐酸胍,吗啉乙磺酸,EDTA,DEPC水;
BufferB:醋酸钠,DEPC水;
BufferC:乙醇,DEPC水。
2.根据权利要求1所述的RNA提取试剂,其特征在于,包括如下组分:
BufferA:1~10mol/L盐酸胍,10~50mmol/L吗啉乙磺酸,10~50mmol/LEDTA,余量为DEPC水;
BufferB:1~10mol/L醋酸钠,余量为DEPC水;
BufferC:50%~90%乙醇,余量为DEPC水。
3.根据权利要求1所述的RNA提取试剂,其特征在于,所述BufferB的pH值为5.0~6.0。
4.一种提取RNA的方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1:采用BufferA裂解细胞,得到细胞裂解混合物;
步骤2:将所述细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合,加入硅胶膜离心柱中,离心,弃掉液体,加入BufferB进行洗涤,再次离心;
步骤3:向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤,离心,弃掉液体,再次离心,洗脱得到RNA;
所述BufferA包括:盐酸胍,吗啉乙磺酸,EDTA,DEPC水;
所述BufferB包括:醋酸钠,DEPC水;
所述BufferC包括:乙醇,DEPC水。
5.根据权利要求4中所述的方法,其特征在于,所述BufferA、所述BufferB与所述BufferC的体积比为(250~450):(400~600):(300~500)。
6.根据权利要求4中所述的方法,其特征在于,所述细胞裂解混合物与所述乙醇水溶液的体积比为(1~2):(1~2),所述乙醇水溶液的体积百分含量为90%~99%。
7.根据权利要求4中所述的方法,其特征在于,所述离心的转速为8000~15000g。
8.一种RNA和DNA提取试剂,其特征在于,包括如下组分:
BufferA:盐酸胍,吗啉乙磺酸,EDTA,DEPC水;
BufferB:醋酸钠,DEPC水;
BufferC:乙醇,DEPC水;
BufferD:NaOH溶液。
9.一种提取RNA和DNA的方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1:采用BufferA裂解细胞,得到细胞裂解混合物;
步骤2:将所述细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合,加入硅胶膜离心柱中,离心,弃掉液体,加入BufferB进行洗涤,再次离心,收集液体得到混合液体;
步骤3:向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤,离心,弃掉液体,再次离心,采用DEPC水洗脱,得到RNA;
步骤4:将步骤2得到的混合液体与BufferD混合,加入到步骤3洗脱掉RNA的硅胶膜离心柱中,离心,弃掉液体,采用BufferC洗涤,再次离心,采用DEPC水洗脱,得到DNA;
所述BufferA包括:盐酸胍,吗啉乙磺酸,EDTA,DEPC水;
所述BufferB包括:醋酸钠,DEPC水;
所述BufferC包括:乙醇,DEPC水;
所述BufferD包括:NaOH溶液。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述混合液体与所述BufferD的体积比为(3~5):1。
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