[发明专利]一种绿盲蝽丝氨酸蛋白酶AlSP4、其多克隆抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组表达载体，其特征在于，含有用于编码绿盲蝽AlSP4蛋白的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，将权利要求1所述的DNA序列插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达绿盲蝽AlSP4蛋白的重组表达载体。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pSUMO-Mut。

4.一种转基因重组菌，其特征在于，所述重组菌是将权利要求3所述的重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到转基因重组菌。

5.根据权利要求4所述的转基因重组菌，其特征在于，所述的大肠杆菌为ArcticExpress。

6.一种绿盲蝽AlSP4蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）、编码绿盲蝽AlSP4开放阅读框cDNA双链的PCR扩增；

2）、绿盲蝽AlSP4蛋白的原核表达载体构建；

3）、HIS-Tag标签抗体的Western-blot验证；

4）、绿盲蝽AlSP4蛋白的变性与复性；

5）、绿盲蝽AlSP4蛋白的分离、纯化即得到重组的绿盲蝽AlSP4蛋白。

7.一种绿盲蝽AlSP4蛋白多克隆抗体，其特征在于，将权利要求6得到的重组绿盲蝽AlSP4蛋白免疫新西兰大白兔后制得。

8.一种绿盲蝽AlSP4蛋白多克隆抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）、将重组的绿盲蝽AlSP4蛋白免疫新西兰大白兔；

2）、抗原亲和纯化法获得针对AlSP4蛋白的多克隆抗体；

3）、AlSP4蛋白的多克隆抗体效价的ELLSA检测。

9.一种绿盲蝽AlSP4蛋白多克隆抗体的表达量特异性Westernblot检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）、取2日龄绿盲蝽成虫提取的总蛋白及体外重组表达纯化的AlSP4蛋白，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、洗膜、封闭；

2）、用封闭液稀释一抗，膜在一抗稀释液中反应，洗膜，封闭液稀释羊抗兔的酶标二抗，膜在二抗中反应，化学发光显影。