[发明专利]一种产加氧酶的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种产加氧酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于产加氧酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AL001，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2015年9月11日，保藏编号为CCTCC NO：M2015524。

2.根据权利要求1所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于：菌落表面粗糙不透明，污白色，边缘不整，需氧生长，培养温度28～39℃，最适温度为30℃，在pH5.0～10.0范围内生长，不产色素，菌株形态长杆状，革兰氏阳性。

3.权利要求1所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用。

4.根据权利要求3所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AL001接种至在产酶培养基，在温度20～37℃，转速200rpm下发酵60～96h，离心取上清得粗酶液；

步骤2，往对硝基苯胺中加入粗酶液，氧化氨基得对二硝基苯。

5.根据权利要求4所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤1中所述的产酶培养基的组分为葡萄糖10～40g/L，蛋白胨10～20g/L，玉米浆10～20g/L，磷酸氢二钾0.7g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钠5g/L，初始pH6～8；发酵温度30℃，通气量为0.5～1v/(v·min)。

6.根据权利要求4所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤2中氧化反应温度20～50℃。

7.根据权利要求6所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，特征在于：步骤2中氧化反应温度为40℃。

8.根据权利要求4所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤2中氧化反应pH为6.0～8.0。

9.根据权利要求8所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤2中氧化反应pH为7.0～7.5。

10.根据权利要求4所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤2中氧化反应为向氧化体系中加入Na⁺、Fe²⁺或Mg²⁺。

11.根据权利要求10所述产加氧酶的枯草芽孢杆菌在实现氨基氧化为硝基中的应用，其特征在于：步骤2中氧化反应为向氧化体系中加入终浓度为10mmol/L Fe²⁺。