[发明专利]一种用于扩增灰葡萄孢菌四个基因的方法及其多重PCR引物组

权利要求书

1.一种用于扩增灰葡萄孢菌四个抗药相关基因的方法，其特征在于共分两步：

第一步：提取灰葡萄孢菌基因组

第二步：进行PCR反应：采用四对引物，分别用于扩增灰葡萄孢菌β-tub、BcOS1、erg27、SdhB基因，四对引物分别为

SEQ ID NO:1 CGATACCGTTGTCGAGCCAT

SEQ ID NO:2 GGTTGCTGAGCTTCAAGGTT

SEQ ID NO:3 ACACCGACCCAGCACCAGA

SEQ ID NO:4 TTAGCAATAACCGCCCAAA

SEQ ID NO:5 CACCCGCGTAGCAAGAGATG

SEQ ID NO:6 TGAGTCAGGTCTCCCTTTGC

SEQ ID NO:7 ATCATGCCCTTGAATTTTGTG

SEQ ID NO:8 CTTTGCCTCCCCTTTCTTCTC

PCR反应混合液中含有提取的待测样品的基因组DNA作为PCR反应的模板，反应体系如下，

PCR反应程序：94℃5min；94℃30sec，59℃30sec，72℃20sec；72℃10min。

2.一种用于扩增灰葡萄孢菌四个抗药相关基因的多重PCR引物组，对应于扩增灰葡萄孢菌β-tub、BcOS1、erg27、SdhB基因，四对引物分别为

SEQ ID NO:1 CGATACCGTTGTCGAGCCAT

SEQ ID NO:2 GGTTGCTGAGCTTCAAGGTT

SEQ ID NO:3 ACACCGACCCAGCACCAGA

SEQ ID NO:4 TTAGCAATAACCGCCCAAA

SEQ ID NO:5 CACCCGCGTAGCAAGAGATG

SEQ ID NO:6 TGAGTCAGGTCTCCCTTTGC

SEQ ID NO:7 ATCATGCCCTTGAATTTTGTG

SEQ ID NO:8 CTTTGCCTCCCCTTTCTTCTC。