[发明专利]一种VOCs增溶菌的开放式发酵培养方法和装置

权利要求书

1.一种VOCs增溶菌的开放式发酵培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.无菌驯化培养：无菌条件下，按2～5v/v%的接种量，将含有VOCs增溶菌的样品接种到灭菌的发酵培养基，28～32℃、170～200rpm驯化培养36～48h，得到驯化种液；

S2.无菌培养：按照容器容积的50～60%计，在容器中加入发酵培养基，用若干层透气的过滤材料封口后灭菌，按照 2～5 v/v %的接种量，无菌条件下转接驯化种液，28～32℃条件下连续曝气培养；

S3.转接培养：按照步骤S2相同的方法，进行多次转接培养；每次转接，对容器进行封口的过滤材料减少一层；

S4.半开放培养：当发酵体系稳定后，由无菌接种变为自然接种，即转接无需在无菌条件下进行，其他方法和条件同步骤S2，继续进行转接培养；每次转接，对容器进行封口的过滤材料减少一层；

S5.完全开放式自然培养：当过滤材料完全减掉时，发酵培养基也不再灭菌，实现完全开放式自然培养；

其中，所述发酵培养基的配方为：硫酸铵5 g/L，废石油20 g/L，葡萄糖1.0g/L，氯化钾1.0 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，pH7～7.5，自来水定容；

步骤S4所述发酵体系稳定是指稳定产生表面活性剂。

2.根据权利要求1所述VOCs增溶菌的开放式发酵培养方法，其特征在于，所述过滤材料为纱布、过滤棉、过滤布或滤膜。

3.一种VOCs增溶菌的开放式发酵培养装置，其特征在于，包括一个无菌操作箱（1）和若干个依次连接的培养容器（2），最后一个培养容器（2）位于无菌操作箱（1）外部，其余培养容器（2）均设置于无菌操作箱（1）内部；所述培养容器（2）通过气流管与曝气装置（3）连接，气流管通过曝气装置（3）上的通气口密封伸入培养容器（2）内部；所述依次连接是通过流液管（5）连接，流液管（5）两端分别通过培养容器（2）上的开孔密封伸入培养容器（2）内部；所述流液管（5）上设置有计量泵（6）和阀门（7）；

所述培养容器（2）用若干层过滤材料（4）封口，按照培养容器（2）依次连接的顺序，过滤材料递减一层，位于无菌操作箱（1）外部的最后一个培养容器（2）不封口；每两个培养容器（2）之间的连接为可拆卸式；

所述流液管（5）上设置有出液管（8），出液管（8）上设置有阀门，出液管（8）出口处连接抽液装置（9）。

4.根据权利要求3所述VOCs增溶菌的开放式发酵培养装置，其特征在于，所述无菌操作箱（1）上对应每个培养容器（2）的位置均设置有手插孔（10）。

5.根据权利要求3所述VOCs增溶菌的开放式发酵培养装置，其特征在于，所述无菌操作箱（1）的内部，每两个培养容器（2）之间有隔板密封隔开，即保证每个培养容器（2）处于独立的密闭空间内。