[发明专利]一种提高大樱桃花粉萌发率的方法

权利要求书

1.一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)花粉的采集：4月初采集含苞待放的铃铛花带回室内，用软毛牙刷刷下花药，置于光滑纸面，用50目铁筛除去花丝，把鲜花药均匀地铺在60cm×45cm的白纸上，置于20-25℃干燥培养箱中干燥散粉，每两小时翻动一次，24h后，花药开裂散出花粉，然后，把花药倒入100目细箩筛，把花粉筛入铝盆中，最后用毛刷将白纸上以及细箩筛上的花粉也轻轻刷入盆中；

(2)花药的保存：将筛出的花粉用硫酸纸小袋包好标记后放入塑料盒子中，再添加1.5-2倍的变色硅胶干燥剂，花粉要分散埋在变色硅胶中，然后密封，放入-18℃冰柜里贮藏备用；

(3)固体培养基的制备：在500mL的烧杯中加入100mL蒸馏水，再加入琼脂，在微波炉中加热，使之完全熔解，然后加入蔗糖，再加入少量硼酸，在其中加入微量聚乙二醇、维生素以形成花粉粒发芽的最适环境条件，促进花粉的萌发，等到溶液冷却后，调节pH值6.5，在熬制培养基时，应在烧杯上的液面处用计号笔沿液面划线标记；当液面在熬制过程中因水分蒸发下降时，应及时添加蒸馏水，以保持培养基的标准浓度，并将熬制好的培养基溶液连烧杯放入盛有35℃热水的容器中，防止冷却凝固，以备随后使用；

(4)器皿消毒：发芽实验时所用的实验用品都要经过酒精消毒处理后备用，使用时要减少和手指接触的面积，以减少污染；

(5)花粉的播种与培养：用滴管吸取培养基溶液，滴一滴于载玻片的中央，当凝固后再进行花粉的播种；播花粉时，用经酒精消毒过的头发丝蘸取花粉，在培养基的表面轻轻震动；播好后将载玻片放置于培养皿中，要事先在培养皿内放好滤纸或棉垫并加水保湿；每种花粉做3个载玻片；而后在培养皿上用玻璃铅笔标号，并进行记录，记录内容包括花粉种类、采粉时间，播种时间；用湿纱布覆盖后加盖，放于光照培养箱内培养；花粉培养15min～25min后部分花粉开始萌发，花粉萌发后花粉管长度超过花粉粒直径，花粉管开始快速生长；

(6)花粉的活力测定：培养3.5h～4h后，以花粉管长度大于花粉粒直径为花粉萌发标准，每处理重复3次，每重复随机观察3～5个视野，每视野观察花粉数30～80粒，统计花粉萌发率。

2.根据权利要求1所述的一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，步骤(3)所述的固体培养基为0.5％琼脂+10％蔗糖+0.3％硼酸+1mg·L^-1吲哚乙酸+30g·L^-1聚乙二醇+10mg·L^-1维生素Vc。

3.根据权利要求1所述的一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，步骤(4)所述的实验用品包括载玻片、盖玻片、镊子；所述消毒处理是将实验用品用无菌纱布包裹浸入70-75％浓度的酒精中消毒10-15s，快速取出立即浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒6min以上，在消毒过程中轻轻晃动使其消毒充分，最后用无菌水冲洗多次。

4.根据权利要求1所述的一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，步骤(5)所述的在用头发丝蘸取花粉在培养基表面震动时，一要在培养基上划波浪线，避免头发丝过重地接触培养基，破坏培养基的表面；二要注意尽量在培养基上均匀划线，使得花粉的分布松散、均匀，不能密集成堆；三要注意适宜的播种数量。

5.根据权利要求4所述的大樱桃花粉采集与活力测定方法，其特征在于，所述的播种数量为一个显微镜视野内分布80～120粒花粉粒。

6.根据权利要求1所述的一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，步骤(5)所述的光照培养箱培养采用光照培养和暗培养相结合的方法；光照培养20min后转为暗培养，再隔20min后切换为光照培养，如此反复。

7.根据权利要求6所述的一种提高大樱桃花粉萌发率的方法，其特征在于，所述光照培养光源采用日光灯，温度控制在20℃-25℃，光照强度为10μmol.m^-2.s^-1～13μmol.m^-2.s^-1。