[发明专利]检测禽偏肺病毒的RT-PCR的方法

说明书

本发明涉及检测禽偏肺病毒的RT‑PCR的方法。该方法特征在于在反转录反应中加入外侧上游引物，其序列如SEQ ID NO：10所示，在PCR反应中加入内侧上游引物和内侧下游引物，其序列分别如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示。经过试验样品和临床样品证实该方法敏感特异，省时省力，节约成本。

技术领域

本发明涉及检测禽偏肺病毒的特异性RT-PCR的方法，特别是检测禽偏肺病毒aMPV/A，aMPV/B和aMPV/C亚群的特异性RT-PCR方法。属于病毒检测领域。

背景技术

近年来流行病学调查显示国内种鸡群广泛感染禽偏肺病毒，已经报道存在禽偏肺病毒(aMPV/A，aMPV/B和aMPV/C)三个亚群。目前套式RT-PCR多用于检测禽偏肺病毒，但套式RT-PCR费时费力而且会增加假阳性率。亚群的特异性的荧光定量RT-PCR价格昂贵，而且对每份样品要一式三份，浪费耗材。

本研究中针对禽偏肺病毒保守的N基因建立了RT-PCR检测方法，可以同时检测禽偏肺病毒，优选是aMPV/A，aMPV/B和aMPV/C三个亚群。经过试验样品和临床样品证实该方法敏感特异，省时省力，节约成本。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测禽偏肺病毒的RT-PCR的方法，优选检测禽偏肺病毒A亚群(aMPV/A)，禽偏肺病毒B亚群(aMPV/B)和禽偏肺病毒C亚群(aMPV/C)的RT-PCR方法。

在一个方面，所述方法包括通过RT-PCR方法扩增禽偏肺病毒N基因，其中在返转录反应中使用的反转录引物如SEQ ID NO：10所示，PCR反应中使用的上游引物序列如SEQ IDNO：11所述，下游引物序列如SEQ ID NO：12所示。

本发明的另一个目的是提供一种检测禽偏肺病毒的试剂盒，所述试剂盒包含用于反转录反应中的如SEQ ID NO：10所示的反转录引物，以及用于PCR反应的上游引物和下游引物，其中上游引物序列如SEQ ID NO：11所示，下游引物序列如SEQ ID NO：12所示。

优选地，所述禽偏肺病毒为禽偏肺病毒A亚群(aMPV/A)，禽偏肺病毒B亚群(aMPV/B)和禽偏肺病毒C亚群(aMPV/C)。

本发明的又一个目的是提供如SEQ ID NO：10所示的反转录引物序列，以及用于PCR反应的如SEQ ID NO：11所示的上游引物和如SEQ ID NO：12所示的下游引物在通过RT-PCR方法检测禽偏肺病毒亚群中的应用。

优选地，所述禽偏肺病毒为禽偏肺病毒A亚群(aMPV/A)，禽偏肺病毒B亚群(aMPV/B)和禽偏肺病毒C亚群(aMPV/C)。

附图说明

图1为RT-PCR引物设计原理图。

图2为RT-PCR敏感性。

图3为本发明RT-PCR反应体系的特异性。

图4为禽偏肺病毒A亚群N基因序列，SEQ ID NO：1。

图5为禽偏肺病毒B亚群N基因序列，SEQ ID NO：2。

图6为禽偏肺病毒C亚群N基因序列，SEQ ID NO：3。

具体实施方式

下文将参考实施例详细描述本发明，所述实施例仅是意图举例说明本发明，而不是意图限制本发明的范围。本发明的范围由后附的权利要求具体限定。

本发明实施例中所用原料及试验试剂的来源：