[发明专利]一种紫草素的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术(PY-GC/MS法)快速检测紫草素含量的方法。

背景技术

紫草是我国传统中药之一，其根入药，具有凉血活血，解毒透疹之功用，主要含有紫草素(shikonin)、乙酚紫草素(acetyIshikonin)、等多种茶酚类化合物，具有广泛的药理作用。紫草的抗炎、抗肿瘤作用非常明显，民间常用于治疗烫伤、溃疡及各种癌症。其中，紫草素是该类中药的重要和主要活性成分，其结构特点是一个萘醌类化合物。药理研究结果也证实了紫草素具有明显的抗炎、抗真菌和抗肿瘤等作用。有文献报道紫草素及其衍生物对多种肿瘤细胞有明显的细胞毒活性，并可诱导人早幼粒白血病HL60细胞和人组织淋巴瘤U937细胞等多种肿瘤细胞的凋亡。因此紫草素或其衍生物是抗癌症的候选药物之一。而快速、高效检测中药或其复方制剂中的紫草素对该类中药的抗癌作用研究和现代化应用是非常重要的。

现有对紫草中紫草素的分析检测要采用液相色谱的方法。往往需要对样品进行较为复杂的样品前处理，通过萃取等方法将紫草素从药材或其复方制剂中分离，随后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色谱方法分析。该分析方法的样品处理过程复杂、总体分析时间长。

快速热解-气相色谱/质谱联用技术(PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成分的技术，近年来发展迅速。低温下的热解过程是一种非常有效的热分离手段，通过控制热解的温度和时间可以实现低沸点的复杂混合物的初步的气-液或气-固相分离；为气相色谱提供一种在线的和实时的样品前处理和初步分离能力。分析检测过程中的热解时间、温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对紫草素的快速、微量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫草素的快速检测方法，并基于此，初步判断紫草及其复方制剂质量的高低。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

1)准确称取紫草或其复方制剂0.1～5.00mg得样品，将样品加入热解杯中；

2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；

3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中紫草素的色谱峰，并获得样品中紫草素的相对含量。

所述样品为块状或粉末状固体。

所述热解的条件为：热解温度为200～400℃，热解时间为0.1～2min。

所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0.1～4.0mL/min的氦气，分流比为0～500：1，升温程序为：初始温度为50～60℃，并保持0～5min，然后以≤30℃/min升至150℃，然后以≤15℃/min升至300℃。

所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50～80eV，离子源温度为220～240℃，单四级杆温度为120～180℃，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1200～2900V，溶剂延迟为0～4min。

所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。

所述紫草素的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。

本发明的有益效果体现在：

1)热分离和色谱分离相结合，实现快速分离。现有方法是将紫草或其复方制剂通过萃取，分离出粗产品后，利用液相色谱或薄层层析色谱等检测其有效成分；该方法的一般分析时间为6～12小时。本发明中通过热分离方法直接对紫草或其复方制剂中低沸点物质进行初步分离，随后采用气相色谱进一步分离紫草素，常规分析时间为0.5～1小时，极大的缩短了分析时间，提高了分析效率。

2)所需样品量少，灵敏度好。现有方法因需要先分离得到粗品溶液，因此需要的样品量较大，本发明方法的分析所用样品量一般为0.1～1mg，提高了分析灵敏度。

3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现了快速和准确检测。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

本发明针对紫草素熔沸点相对较低且易挥发的特点，采用快速热解-气相色谱/质谱联用技术(PY-GC/MS)，充分将热分离和色谱分离相结合，实现紫草素的快速分离，随后采用质谱定性和定量检测，达到快速、微量检测的目的。

实施例

一种基于PY-GC/MS检测紫草素的方法，以中药材紫草为例，但本发明的保护范围不局限于该实施例，具体步骤如下：