[发明专利]一种检测抗除草剂草甘膦蛋白的单克隆抗体及其用途

说明书

本发明提供了一种杂交瘤细胞株。该交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.10497。本发明还提供了由该杂交瘤细胞分泌的一种单克隆抗体和它们在检测抗除草剂草甘膦蛋白的用途。本发明的杂交瘤细胞株所分泌得到的单克隆抗体能够用于G2‑EPSPS蛋白的免疫杂交检测，可检测到重组G2‑EPSPS蛋白及转G2‑EPSPS作物种子；对CP4‑EPSPS蛋白不呈现交叉反应，和4种不同来源的各种非G2‑EPSPS转基因作物也不呈现交叉反应。

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞株、一种单克隆抗体及其在检测抗除草剂草甘膦蛋白中的用途。

背景技术

20世纪80年代以来，转基因抗除草剂作物得到了大面积的推广与种植，开创了抗除草剂作物发展的新局面。由于草甘膦除草剂具有广谱、无土壤残留及环境友好的特性，草甘膦陆续在100多个国家注册，其用量与日俱增，成为世界上应用最广、产量最大的农药品种，其年销售值一直居农药之首，全世界年销售值超过了29.3亿美元。但它作为一种非选择性除草剂，对农作物同样有灭生性作用，这极大限制了草甘膦在农业生产中的应用范围。美国孟山督公司通过向植物转入具草甘膦抗性的CP4-EPSPS基因，成功培育出了商业化的转基因抗草甘膦作物，大大减少了田间杂草使用草甘膦的用量及除草费用，为草甘膦的应用发展开辟了新的途径。目前已取得了一系列抗草甘膦作物，它们是：大豆、棉花、玉米、油菜、甜菜、烟草、花生、小麦、向日葵、马铃薯、水稻、番茄、苜蓿、百脉根、黑麦草、杨树等，具有我国自主知识产权的高抗草甘膦的5－烯醇丙酮酸莽草酸－3－磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase，EPSPS)的转基因油菜、玉米、小麦和棉花已进入中间实验阶段。随着转基因作物研发和商品化的快速发展，转基因作物释放可能带来的环境安全问题引起了人们的高度重视。因此，建立和完善转基因成分的检测技术，尤其是我国比较缺乏的转基因作物蛋白检测技术，既是转基因安全性评价的重要研究内容，也是基因工程安全管理的重要技术保障；为促进我国转基因作物产业化开发提供有力的技术支撑，保护我国人民健康，保护广大农民的利益和我国农业的持续健康发展具有重要意义。

G2-EPSPS蛋白编码基因克隆自草甘膦污染土壤细菌基因组文库，具有很高的草甘膦耐受性。该基因编码的蛋白经分析属于Class I类型，酶活测定显示该蛋白具有高底物亲和能力和低草甘膦亲和力，因此能赋予宿主高草甘膦除草剂耐受力。在酶学水平上G2-EPSPS基因草甘膦耐受性高于孟山都公司的CP4-EPSPS基因。

在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。这些定性或半定量测定的关键在于单克隆抗体的使用，但是，目前已有的抗G2-EPSPS蛋白的单克隆抗体难以达到较高的敏感度和特异性。

发明内容

本发明的目的是提供一种较高的敏感度和特异性的抗G2-EPSPS蛋白的单克隆抗体。

为了实现上述目的，一方面，一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.10497。

再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.10497的杂交瘤细胞株产生。

再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体转G2-EPSPS基因农作物中的用途。

通过上述技术方案，本发明能够通过WESTERN BLOT方法对G2-EPSPS蛋白进行检测，并对CP4-EPSPS蛋白不呈现交叉反应，并且对5种不同来源的各种非G2-EPSPS转基因作物也不呈现交叉反应。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

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