[发明专利]竹黄分离真菌瓶生顶孢霉及其在生产麦角甾酮中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物资源利用领域，涉及到微生物医药产业中麦角甾酮天然活性产物的生产方法，具体就是一株真菌瓶生顶孢霉(Acremonium cavaraeanum)及其所产麦角甾酮化合物的固体发酵方法。

背景技术

麦角甾酮主要分布在多种药用真菌和药用植物中，分离纯化自真菌菌丝、子实体及发酵液的研究较多。从真菌中获得麦角甾酮的文献如陈若芸等(1991)从赤芝孢子脂溶部分分离获得麦角甾酮。项晨等(2011)从银白离褶伞的子实体中用氯仿/甲醇(1:1，v/v)浸提获得23g浸膏，最终分离获得21.5mg麦角甾酮，得率约为0.93‰。高锦明等(2002)从野生真菌耳状网褶菌子实体中分离得到麦角甾酮。Lee et al(2005)从猪苓菌核中分离出麦角甾酮，并发现其对HT-29(结肠癌)，HeLa细胞229(子宫颈癌)，Hep3B细胞(肝癌)，和AGS(胃癌)具有一定的细胞毒活性。李向敏等(2009)对灵芝孢子进行萃取所得到的脂溶性组分应用硅胶层析、反相硅胶层析、葡聚糖凝胶层析和高效液相半制备等色谱技术分离纯化获得麦角甾酮。从植物中获得麦角甾酮的文献如刘红兵等(2005)从东京枫杨的茎皮中利用Sephadex LH-20和硅胶等柱色谱和重结晶等技术分离到麦角甾酮。崔莹等(2007)从10Kg中华猕猴桃根中用95％乙醇浸提获得7mg麦角甾酮。王忠昭等(2011)从半红树的茎和树皮中用石油醚和乙酸乙酯浸提获得123g浸膏，通过一系列分离手段获得6.7mg麦角甾酮。另外，还有一些通过液体发酵获得麦角甾酮的报道，如李想等(2007)从红树植物内生真菌Penicillium sp.的发酵菌丝中浸提得到37g浸膏，最终分离获得23mg麦角甾酮，得率约为0.62‰。牛芸(2013)从18L大皮伞的发酵液中用乙酸乙酯浸提获得6.6g浸膏，最终分离得到7.8mg麦角甾酮，得率约为1.18‰。邓慧颖等(2011)从海莲内生真菌Pestalotiopsis clavispora的发酵液中分离获得麦角甾酮。李壮壮等(2014)从条纹拟盘多毛孢Pestalotopsis virgatula的发酵液中分离到麦角甾酮。关于麦角甾酮的专利有：CN 103816163 A：发现从火木层孔菌的液体发酵液和子实体中分离到的麦角甾酮具有抗禽流感活性。CN 103864874 A：从桑黄子实体中分离出麦角甾酮，并研究了其在制备抗肿瘤药物中的应用。CN 103044511 A：从桑黄菌丝发酵全液中分离麦角甾酮的方法。CN 103265597 A：研究了从虎杖药材中制备麦角甾酮的方法。CN 101785776 A：研究了麦角甾酮在制备治疗慢性肾衰竭药物中的应用。CN 101596201 A：研究了麦角甾酮在制备利尿药物中的应用。CN 103265596 A：研究了麦角甾酮用于制作化学传感器材料和装饰材料的应用，其制成的化学传感器荧光性能优异。

目前，尚未见关于固体发酵获得麦角甾酮的公开文件。本专利利用竹黄分离真菌瓶生顶孢霉CA01固体发酵生产麦角甾酮，极大地提高了产率，得率高达1.89‰，明显高于已文献报道中的产量。并且可用于扩大生产。

发明内容

本发明公开了一种竹黄分离真菌瓶生顶孢霉(Acremonium cavaraeanum)CA01，及其通过固体发酵获得麦角甾酮的方法，包括菌株的获得和发酵。首先采集竹黄子实体，表面消毒后采用组织分离法分离真菌菌株，对产生麦角甾酮的菌株进行固体发酵，然后将发酵料烘干、粉碎，用有机溶剂浸提，经减压柱、常压硅胶柱等手段进行分离纯化，然后在甲醇中重结晶获得目标产物，通过HPLC在350nm处检测其纯度。该化合物为黄绿色晶体(甲醇)，分子量：392，分子式：C₂₈H₄₀O，在365nm紫外灯下显蓝色荧光。。

本发明的技术解决方案将进一步说明。

一株真菌瓶生顶孢霉(Acremonium cavaraeanum)，该菌株编号为CA01，分离自竹黄子实体，菌株保藏号为CGMCC No.10816。

本发明还公开了瓶生顶孢霉CA01菌株在生产麦角甾酮中的应用。

一种用瓶生顶孢霉CA01菌株生产麦角甾酮的方法，是瓶生顶孢霉CA01菌株通过固体发酵生产麦角甾酮。