[发明专利]见血青的离体保存方法

权利要求书

1.见血青的离体保存方法，用见血青果荚，经表面消毒，将果荚破开，取外植体种子，接种在种子萌发培养基上，长出带叶子的小苗，经丛芽增殖培养基培养获得假鳞茎，假鳞茎转接在离体保存培养基中，离体保存的小苗经常规炼苗后进行移栽，所述的培养基如下：(1)种子萌发培养基：基本培养基为MS大量元素减半，其余成分与MS相同的1/2MS培养基；(2)丛芽增殖培养基：含大量元素、微量元素和铁盐的MS+B5维生素+IAA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+肌醇100mg/L；(3)离体保存培养基：1/2MS+PPP₃₃₃ 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；以上培养基(1)和(2)只添加蔗糖20g/L，(3)添加蔗糖40g/L和活性炭1-2g/L；所有培养基均添加琼脂5.8g/L固化，pH5.8，在如下培养条件下培养：培养温度25±2℃，光照强度10-20μmol/(m²·s)，光照12h/d。

2.如权利要求1所述的见血青的离体保存方法，其特征在于所述的外植体种子的获得是选择野外生长发育良好、没有病虫害的见血青果荚，在果荚成熟未开裂之前采摘，将其表面附着物搽洗干净，将经过初步处理的蒴果用75％酒精进行表面消毒20-30s，再用无菌水冲洗5遍，用0.1％HgCl₂水溶液进行消毒15-20min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干果荚表面水分，然后切开果荚，将种子散落到种子萌发培养基中，接种7周后，出现原球茎分化，10周后出现叶原基分化。

3.如权利要求1所述的见血青的离体保存方法，其特征在于所述的丛芽增殖培养是将经种子萌发培养得到的带有一片叶子的见血青小苗，去除须根后接种至丛芽增殖培养基上，每瓶接种5个外植体，45天后出现芽分化，并在原假鳞茎的顶部或基部长出新的假鳞茎，继续在此培养条件下继代培养2-3次，60天继代一次，增殖率达1∶5，新增殖出的假鳞茎大小为0.2cm×0.3cm-0.3cm×0.4cm，呈淡绿色。

4.如权利要求1所述的见血青的离体保存方法，其特征在于所述的离体保存培养是将经丛芽增殖培养得到的新增殖的假鳞茎转接在离体保存培养基上，每个培养瓶接种5个，培养60天后，假鳞茎转为墨绿色并增大，基部的假鳞茎呈近圆形，顶部的假鳞茎长圆柱形，不断长出新假鳞茎，继续在离体保存培养基中培养，假鳞茎增大和分化同时有气生根生成；在此培养条件下，培养瓶口用保鲜膜缠绕数圈封严，培养基增加到每瓶75ml，继代周期延长至3年以上，所用培养瓶为白色透明玻璃瓶，直径7.5cm×高9.0cm，容积300ml。

5.如权利要求1所述的见血青的离体保存方法，其特征在于所述的移栽是将离体保存3年以上的见血青带根小苗进行移栽，先将瓶苗放在大棚内炼苗1周，然后从培养瓶中取出生根苗,洗去附着的培养基，晾干水分后进行移栽，移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，早期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，可揭膜粗放管理。