[发明专利]用于IgA肾病快速识别和早期诊断的变色传感器制备方法

说明书

本发明公开了一种用于IgA肾病快速识别和早期诊断的变色生物传感器制备方法，首先应用薄膜法或注入法得到稳定的类丁二炔囊泡分散体；然后将探针凝集素溶解在pH值为6‑8的缓冲液中，按凝集素与类丁二炔囊泡摩尔比1:1‑1:5的比例，加入到类丁二炔囊泡分散体中；最后在4‑37℃条件下，溶液中的凝集素通过物理吸附或化学偶联方式修饰类丁二炔囊泡表面，获得对血清中具有异常O‑型糖基化的IgA1标志物的核心片断‑‑‑‑N‑乙酰半乳糖胺，具有特异性识别功能的工具。本发明操作简便、快速、准确、经济，且价格远低于同类产品，有利于IgA肾病快速识别、早期诊断和普查的推广使用。

技术领域

本发明属于临床医学技术领域，尤其涉及一种用于IgA肾病快速识别、早期诊断和普查的变色生物传感器制备方法。

背景技术

IgA肾病是以肾小球系膜区IgA沉积为病理特征的肾小球肾炎，是世界范围内(特别是东亚地区)青少年最常见的原发性肾小球疾病。IgA肾病是一种进展性疾病，统计数据表明，只有5-30％的尿检异常患者能完全缓解，大多数呈慢性进行性发展。已确诊的患者，在5-25年内有20-40％将进入终末期肾脏疾病(ESRD)。由于IgA肾病具有多样的临床表现，复杂的病理改变和不同的预后，多数学者认为IgA肾病不是单一的疾病，而是一个综合病症。针对上述情况，如果能在IgA肾病发病初期做出正确的诊断，并采取适当的治疗方案，给与干预，将大大改善治疗效果及提高治愈率。不幸的是，IgA肾病早期具有极大的隐匿性，大多患者，特别是青少年，初期甚至没有任何不适，常规的血、尿检查并不能准确判断该肾病。迄今IgA肾病最终确诊依赖于“金标准”--肾穿刺活检。肾活检是一个非常痛苦又昂贵的侵入性检查方法，患者恐惧于这种检查，导致患者和医务工作者麻痹。因此，对IgA肾病的早期识别和诊断研究是目前国内外的IgA肾病研究热点之一。

目前对IgA肾病进行体外早期诊断方法，主要有质谱法、单糖组成分析法、蛋白免疫印迹法、ELISA法等，这些方法要求培训专业操作人员、设备复杂、分析耗时、价钱昂贵等，更重要的是这些方法不能用于基层医院或大面积普查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于IgA肾病快速识别和早期诊断的变色传感器制备方法，旨在解决目前对IgA肾病进行体外早期诊断方法要求培训专业操作人员、设备复杂、分析耗时、价钱昂贵，不能用于基层医院或大面积普查的问题。

本发明是这样实现的，一种用于IgA肾病快速识别和早期诊断的变色传感器制备方法，所述用于IgA肾病快速识别和早期诊断的变色传感器制备方法包括以下步骤：

首先应用薄膜法或注入法得到稳定的类丁二炔囊泡分散液；

然后将探针凝集素溶解在pH值为6-8的缓冲液中，按凝集素与丁二炔囊泡的摩尔比1:1-1:5的比例，加入到丁二炔囊泡分散体中；

最后在4-37℃条件下，溶液中的凝集素与丁二炔囊泡通过物理吸附或化学偶联修饰，得到对血清中具有异常O-型糖基化的IgA1标志物的核心片断----N-乙酰半乳糖胺(GalNAC)，具有特异性识别功能的工具，该工具通过可见光范围内颜色变化，用于IgA肾病早期识别与诊断。避光保存。

进一步，所述丁二炔的类化合物为10,12-二十七碳二炔酸、10,12-二十九碳二炔酸、5,7-十六碳二炔酸、10,12-二十五碳二炔酸、10,12-二十三碳二炔酸、10,12-二十五二炔-1-醇、10,12-二十五烷二炔酸甲酯、2,4-十五碳二炔酸、2,4-十七碳二炔酸、2,4-十九碳二炔酸、2,4-二十一碳二炔酸中的任意一种。

进一步，所述凝集素为蚕豆凝集素、蜗牛凝集素、刀豆素A、花生凝集素和大豆凝集素、昆虫血淋巴凝集素中的任意一种。

进一步，所述缓冲溶液磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐、硼酸盐、巴比妥酸、三羟甲基氨基甲烷碱、醋酸盐缓冲液中的任意一种。

进一步，所述联剂为碳二亚胺、戊二醛、京尼平、谷氨酰胺转胺酶中的任意一种。