[发明专利]阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱及使用方法

权利要求书

1.阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱，其特征在于：所述的固相萃取柱采用如下方法进行制备：

(1)将阿米卡星、链霉素和甲基丙烯酸按照0.95～1.05:1.05～0.95:8的摩尔比混合溶解于水和乙腈混合溶剂中，超声振荡至混合均匀后于室温下放置过夜，其中水、乙腈的体积与甲基丙烯酸量的比值为5:35mL:1mmol，按照阿米卡星、链霉素与乙二醇二甲基丙烯酸酯摩尔比为0.95～1.05:1.05～0.95:40的比例以及与偶氮二异丁腈摩尔比为0.95～1.05:1.05～0.95:3.65的比例将二者加入到上述溶液中超声振荡至混合均匀后，向装有溶液的容器通入氮气以去除氧气，保证聚合反应能够顺利进行，然后将容器置于58℃-62℃恒温水浴振荡器中在旋转条件下反应，制得聚合物微球，将聚合物微球置于索式提取器中，用乙酸-甲醇混合溶剂洗去模板分子，然后用甲醇清洗去除聚合物微球中残留的乙酸，最后放入真空干燥器中干燥至恒重，得到阿米卡星和链霉素双模板分子印迹聚合物微球；

(2)称取阿米卡星和链霉素双模板分子印迹聚合物微球，填充至底部装有筛板的空固相萃取柱中，再在填料的上方放置筛板并压实，制得阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱。

2.如权利要求1所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱，其特征在于：所述的在旋转条件下反应指在120-180rpm转速下反应20-24h，在20h聚合反应完毕，可以继续增加至24h，但对实验结果无影响，超过24h这个时间聚合物的吸附能力会有所下降。

3.如权利要求1所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱，其特征在于：所述的乙酸-甲醇混合溶剂指乙酸和甲醇按照体积比1:9混合得到的溶剂。

4.如权利要求1所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱，其特征在于：所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹聚合物微球填充至底部装有筛板的空固相萃取柱中的填充的高度不低于12mm。

5.如权利要求1所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱的使用方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)将上述分子印迹固相萃取柱置于真空固相萃取装置上，依次用乙腈、甲醇和水在负压状态下淋洗活化，并抽干淋洗溶剂，其中三种溶剂的体积比为1:1:1；

(2)使制备的以乙腈为溶剂的样品溶液在负压状态下连续通过固相萃取柱，抽干溶剂；

(3)以乙腈和甲醇的混合溶剂为淋洗剂，在负压状态下连续通过固相萃取柱进行淋洗，抽干淋洗剂，并保持连续抽干状态；

(4)以甲醇和水的混合溶剂作为洗脱剂，在负压状态下连续通过固相萃取柱对分析物进行洗脱，抽干洗脱剂；

(5)将洗脱液用氮气吹干，用水溶解干渣并定容后供毛细管电泳检测。

6.如权利要求5所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱的使用方法，其特征在于所述毛细管电泳检测按照下述电泳条件进行：运行缓冲液组成为180mmol/L三羟甲基氨基甲烷和300mmol/L 1-戊烷磺酸钠，pH为9.1，使用前超声10min；分离电压12kV；进样量为6.9kPa×10s；检测波长200nm。

7.如权利要求5所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱的使用方法，其特征在于：所述负压状态指-20kPa～-100kPa。

8.如权利要求5所述的阿米卡星和链霉素双模板分子印迹固相萃取柱的使用方法，其特征在于所述样品溶液采用如下步骤制备：

(1)称取20.0g经匀浆后的带有氨基糖苷类抗生素残留的鸭肉或牛奶，均匀分置于4个50mL聚乙烯离心管中或称取20.0g经匀浆后的没有氨基糖苷类抗生素残留的空白鸭肉或牛奶，加入5种氨基糖苷类抗生素混合标准溶液，使每种氨基糖苷类抗生素的加标量为0.05mg/kg，均匀分置于4个50mL聚乙烯离心管中；

(2)每管加入三氯乙酸15mL，涡旋混匀后置于恒温水浴振荡器中振摇30min，4000r/min下离心5min，取上清液，每管残渣再加入三氯乙酸15mL，重复上述操作，合并两次上清液于试管中，置于60℃恒温水浴锅中蒸发至干，用乙腈溶解干渣并定容至1mL，经0.45μm滤膜过滤，共获得4mL鸭肉或牛奶样品溶液。