[发明专利]一种半定量可视化酶联免疫分析方法

权利要求书

1.一种半定量可视化酶联免疫分析方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

（1）显色纳米金的制备：首先根据柠檬酸钠还原法合成纳米金，其粒径为15±5nm；然后根据金种生长法，合成十六烷基三甲基溴化铵包裹的纳米金，其粒径为45±15nm；

（2）可视化检测蛋白抗原：首先根据经典ELISA法，捕获抗体—抗原—检测抗体发生特异性反应，然后将链霉亲和素化的辣根过氧化物酶与生物素化的检测抗体相结合，从而将辣根过氧化物酶链接在抗体上；加入相应的TMB显色剂后，反应30min，加入盐酸终止酶促反应；同时生成了黄色的TMB²⁺；此时加入步骤（1）制备好的十六烷基三甲基溴化铵包裹的纳米金，TMB²⁺就会与纳米金发生反应，从而将原来单一的黄色变化转变为红－黄双色变化，通过目测溶液颜色的变化可以对目标抗原进行半定量分析。

2.根据权利要求1所述半定量可视化酶联免疫分析方法，其特征在于：步骤（1）中柠檬酸钠还原法具体步骤为在剧烈搅拌下将100mL、2.5×10^-4M氯金酸放在120℃油浴锅中回流30min；然后向其中加入10mL1wt%的柠檬酸钠溶液，在搅拌状态下反应20min，然后关闭加热，继续搅拌回流至室温。

3.根据权利要求1所述半定量可视化酶联免疫分析方法，其特征在于：所述金种生长法为首先配制生长液60mL，其中含有氯金酸2.5×10^-4M、十六烷基三甲基溴化铵0.01M，然后加入0.1M的抗坏血酸3mL作为还原剂，搅拌2min，最后加入纳米金30mL，混合均匀后在30℃的水浴中放置6-8h，合成十六烷基三甲基溴化铵包裹的纳米金。

4.根据权利要求1所述半定量可视化酶联免疫分析方法，其特征在于：步骤（2）中黄色TMB²⁺和十六烷基三甲基溴化铵包裹的纳米金的反应时间为5~30min，反应温度为室温。