[发明专利]一种快速简易病理冷冻标本制片方法

说明书

技术领域

本发明属于医学病理检测技术领域，具体涉及病理冷冻标本制片方法。

背景技术

随着当代医疗水平的提高，病理学作为基础医学与临床医学相联系的“枢纽”，其在医学中所处的不可或缺的地位也日益显现出来。而病理技术是病理学诊断和研究所必需的一部分，种类繁多的病理技术能够精细地提供组织、细胞、分子等多方面多层次的信息，为病理学的诊断和研究提供了更加科学、准确和可靠的形态学和分子生物学依据，提高了诊断的正确率，加深了我们对疾病的病因、病理变化和疾病发生发展过程规律性的认识，促进了病理学的飞速发展，同时也大大促进了以病理诊断为依据参考的其他相关学科的发展。

伴随着新生事物的蓬勃发展，病理技术也带了日新月异的技术变革与发展。作为病理技术的一个重要组成部分——病理冷冻标本制片技术，也亟待新的变化与发展。

目前，单件标本冷冻切片技术（王伯沄，李玉松，黄高昇，张远强主编.病理学技术.人民卫生出版社，2000，P128-134）要求是15分钟之内完成。该方法具体操作如下：

1.取材（4分钟），未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm；

2.冷冻（1分钟），取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10～-15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～-20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃；

3.制片（5分钟）将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。调好防卷板。制作冰冻切片，切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可；

4.染色（4分钟）

(1)冷冻切片固定：10~30s；

(2)稍水洗：1～2s；

(3)苏木精液染色：1～2min；

(4)流水洗去苏木精液：5~10s；

(5)l％盐酸一乙醇：1～3s；

(6)稍水洗：1～2s；

(7)返蓝(用温水或1％氨水等)：5~10s；

(8)流水冲洗：15-~30s；

(9)0.5％伊红液染色：5~10s；

(10)蒸馏水稍洗：1～2s；

(11)80％乙醇：1～2s；

(12)95％乙醇：1～2s；

(13)无水乙醇Ⅰ：1～2s；

(14)无水乙醇Ⅱ：1～2s；

(15)吹风机风干：1～2s；

5.封片（50s）中性树胶封固；

6.贴标签（50s），写好标签，对应申请单上的病理号，粘贴在载玻片上。

上述方法操作复杂，而且随着现代设备的更新以及技术的发展，很多步骤都已失去了原有的意义，更为突出的是，该方法耗时过长，渐渐地满足不了标本快速冰冻切片技术的要求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术上的不足，提供了一种操作复杂程度较低，质量较高，是一种根据多年实践经验以及结合现代医学要求和设备特点的病理冷冻标本制片方法，利用该方法，能够快速简易制作冷冻标本切片。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种快速简易病理冷冻标本制片法，包括下列步骤：

1.在取材台上，用病理取材刀切取典型新鲜病变标本一块；

2.将步骤1中切取的标本在冷冻切片机内冷冻台上，-22℃冷冻1min；

3.将冷冻后的标本在冷冻切片机内，用切片刀修平病变标本面，切取最大切面，切片厚度为3um，用毛刷展平，不用防卷板，然后粘贴在载玻片上右侧1/3与2/3交界处；

4.将载玻片放置在95ml95%酒精和5ml冰醋酸混合成的固定液中20s，固定载玻片上的标本；

5.把载玻片上标本放在Gill改良苏木精染液内染色1min；

6.用自来水冲洗载玻片上多余的染液，用时20s；

7.把载玻片上标本放在1%盐酸酒精液内分化2s；