[发明专利]适用茶叶中吡虫啉等3种农药多残留速测法及所用试纸条

说明书

技术领域

本发明属于小分子化合物的金标免疫分析检测领域，具体涉及一种基于直接竞争免疫层析法的农药残留金标速测试纸条，该试纸条适用于茶叶样品中氯代烟碱类农药吡虫啉、噻虫胺和氯噻啉的多残留快速检测。

背景技术

自美国、欧盟、日本加强对进口食品、农产品检疫检验力度后，我国茶叶出口呈现大幅下降的趋势，其主要原因是农药超标困扰我国茶叶出口。近几年来，由于吡虫啉等氯代烟碱类农药在茶叶上使用频率高，导致吡虫啉等农药在茶叶上检出率高。2014年8月青岛出入境检验检疫局对一批进口乌龙茶实施抽样检验时检出吡虫啉超标2倍，进口茶叶也存在氯代烟碱农药超标问题。欧盟食品安全局(EFSA)发布的报告指出，新烟碱类农药对授粉昆虫构成“严重风险”，这类农药与蜜蜂死亡有关。鉴于蜜蜂大量死亡，可能影响农作物的授粉，2013年5月欧盟的15个成员国举行投票，同意实行临时禁令，在未来两年将禁用吡虫啉、噻虫胺以及噻虫嗪3种新烟碱类农药。

鉴于常规的农药残留检测仪器分析方法(如气相、液相色谱及质谱联用)满足不了茶叶样品在较短时间内完成快速检测的需求，因此，人们迫切希望有一种简便、快速、价廉及信息量大的农残检测技术能在野外现场和实验室内进行大批量的快速筛查试验。迄今，常见的农药残留现场快速筛查方法为酶抑制显色纸片法，但其检测假阳性比率偏高，受基质干扰大，检测对象局限于有机磷类和氨基甲酸酯类农药，且特异性不高。近些年来，基于抗原-抗体特异性反应的免疫化学分析法是农残快速检测技术的研究热点之一，其中研究报道最多的是酶联免疫吸附法(ELISA)，已研制出多类农药ELISA试剂盒，确实有潜在的市场应用前景，但检测需要多步反应，仍不能真正实现现场快速筛查。

胶体金标记技术是继同位素、酶、荧光素及乳胶标记技术之后的一种新型实用的标记技术。基于胶体金免疫层析技术的试纸条以其使用便捷、价格低廉、筛查结果可视化、环境友好性等独特优势更受大众欢迎。近些年来，适用于检测小分子化合物的竞争型金标试纸条研发也越来越多，有关农药方面的公开报道集中在三嗪类、有机磷类、氨基甲酸酯类，而针对新烟碱类农药金标试纸条的仅涉及吡虫啉、噻虫嗪和噻虫胺单残留或双残留的测定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单、灵敏度高、结果可视化、适用于现场速测等优点的适用于茶叶中吡虫啉等3种氯代烟碱类农药多残留现场速测试纸条(基于间接竞争免疫层析法的农药多残留金标速测试纸条)及其具体使用方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种适用于茶叶中吡虫啉等3种氯代烟碱类农药多残留速测的异源竞争免疫层析金标试纸条(基于直接竞争免疫层析法的氯代烟碱类农药金标速测试纸条)，该试纸条包括衬板(例如为PVC衬板)、样品垫(例如为玻璃纤维样品垫)、金标一抗结合垫、硝酸纤维素膜---NC膜、吸水垫，所述金标一抗结合垫上包被有胶体金标记的吡虫啉类特异性小鼠单抗(一抗)，硝酸纤维素膜---NC膜上包被有用于异源竞争的氯噻啉或噻虫胺人工抗原的检测线---T线和包被有兔抗鼠IgG(二抗)的质控线---C线。

备注说明：在本发明中，吡虫啉等3种氯代烟碱类农药就是指吡虫啉、噻虫胺和氯噻啉。

作为本发明的适用于茶叶中吡虫啉等3种氯代烟碱类农药多残留速测的异源竞争免疫层析金标试纸条的改进：胶体金标记的吡虫啉类特异性小鼠单抗(一抗)是由20～40nm(例如为30nm)的纳米金颗粒与吡虫啉类特异性小鼠单抗相结合的复合物，吡虫啉类特异性小鼠单抗与胶体金的结合浓度为3～10mg/L(较佳为4mg/L)，即，每1L的胶体金溶液中配用3～10mg(较佳为4mg)的吡虫啉类特异性小鼠单抗。

备注说明：该吡虫啉类特异性小鼠单抗(一抗)对吡虫啉、氯噻啉和噻虫胺的识别能力接近。胶体金溶液中胶体金的质量浓度为0.01％；包被量为0.4～0.6μL/mm²(较佳为0.5μL/mm²)。

作为本发明的适用于茶叶中吡虫啉等3种氯代烟碱类农药多残留速测的异源竞争免疫层析金标试纸条的进一步改进：检测线---T线包被的用于异源竞争的氯噻啉或噻虫胺人工抗原是指将氯噻啉半抗原或噻虫胺半抗原偶联到鸡卵清蛋白(OVA)上的人工抗原，浓度为100～500mg/L；氯噻啉半抗原或噻虫胺半抗原与OVA的偶联比为8:1～15:1(例如为10:1)。

兔抗鼠IgG(二抗)的质控线---C线的浓度为50～200mg/L。

T线和C线的包被量均为0.04～0.06μL/mm(较佳为0.05μL/mm)。