[发明专利]诱导普通小球藻ZF藻株高效积累EPA的方法

说明书

本发明提供一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累EPA的方法，其特征在于采用如下步骤：1)制备藻液：在23℃±2℃、光强1900±100lx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BG11培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天到对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次1倍浓度的BG11营养盐；2)积累EPA：取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂6‑BA，植物生长调节剂6‑BA在藻液中的浓度为1±0.05mg/L，于23℃±2℃进行诱导处理14±1天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现EPA在藻液中的积累。本发明简单易行、成本低廉，能在短期内显著积累EPA含量。

技术领域

本发明提供一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累EPA的方法，属于生物技术领域。

背景技术

小球藻(Chlorella)是一种常见的水生单细胞藻类，是绿藻小球藻科中的一个重要属，生态分布广泛，在海水和淡水中均有分布，目前包括大约10个种。小球藻细胞内含有丰富的蛋白质(干重的50％)、必需氨基酸、多糖、脂类(脂肪酸积累的结果)、叶绿素、胡萝卜素、和维生素等等，在保健食品、水产养殖(饲料添加剂)、化妆品、医药等领域内应用广泛，国内外市场供不应求。与美国、日本、以色列等国家相比，我国的小球藻工业化大规模培养水平相对滞后。普通小球藻ZF藻株是一种球形单细胞淡水藻类，通常生长在富营养化的水体中，但在人工培养条件下能大量生长繁殖。营养盐(氮、磷等)、光照、pH值、温度、微量元素(铁、锰、硒等)、碳酸氢铵、等因素均能影响小球藻生长。

二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)，是一种n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid，PUFA)，即第1个双键出现在碳链甲基端的第3位。EPA在营养和医学上都具有重要的生理活性，可促进大脑发育、改善大脑功能、提高记忆力，对防治心脏疾病、动脉硬化、癌症、风湿关节炎、气喘和糖尿病等也有明显效果。目前主要从鱼油中获得，但鱼油来源的产品腥味较大，品质不高，产量不稳定。近来通过微藻提取纯化DHA、EPA已经成为国内外研究的热点。植物生长调节剂是植物体内产生的对植物生长发育起调控作用的化学物质，可分为五大类：生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类、脱落酸和乙烯，而且这五大类生长调节剂在藻类中均已发现，植物生长调节剂对植物的生长发育具有明显的促进作用并已广泛用于农业生产中。植物生长调节剂作为一种植物生长调节剂，具有操作简单、诱导率高、速度快、造价低、损伤轻、无污染、安全性强等诸多优点。微藻是进行植物生长调节剂诱导的优良材料，其结构简单、生命周期短、光敏性强、代谢过程极易受环境影响，也容易被检测。