[发明专利]光滑爪蟾皮肤抗菌肽及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种光滑爪蟾皮肤抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、提取光滑爪蟾皮肤分泌物：由物理刺激光滑爪蟾皮肤诱导皮肤分泌出分泌物，用超纯水收集上述分泌物后，离心去除沉淀取上清，上清经过滤后，再次离心，制得粗提物，用金黄色葡萄球菌S.aureusATCC29213检测粗提物的抗菌活性，利用冻干机对粗提物进行浓缩后冷冻保存；

步骤A中光滑爪蟾皮肤分泌物由物理刺激光滑爪蟾皮肤后得到，物理刺激为恒压电刺激，电压为15-20V；离心时的转速为12000rpm；

B、制备型高效液相色谱分离纯化；并按照下表内容设置洗脱程序：

C、制备液相分离峰的活性检测；其中测试菌为金黄色葡萄球菌，采用方法为抑菌圈活性检测；

D、分析型高效液相色谱分离纯化；并按照下表内容设置洗脱程序；

时间（min）	流速（mL/min）	比例（%B）
0.01	1	0
5.00	1	0
20.00	1	5
60.00	1	40
70.00	1	70

E、分析液相分离峰的活性检测及质谱鉴定，活性检测方法与步骤C中的检测方法相同；

制备的光滑爪蟾皮肤抗菌肽是包括4分子天冬氨酸和1分子谷氨酸的序列为Asp-Glu-Asp-Asp-Asp即DEDDD的5肽。

2.根据权利要求1中所述的光滑爪蟾皮肤抗菌肽的制备方法，其特征在于：制备的光滑爪蟾皮肤抗菌肽的分子量为607.7Da。

3.权利要求1或2所述的光滑爪蟾皮肤抗菌肽在制备抗菌药物中的应用。

4.权利要求1或2所述的光滑爪蟾皮肤抗菌肽在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。