[发明专利]Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶及其制备方法有效
申请号: | 201510609308.0 | 申请日: | 2015-09-23 |
公开(公告)号: | CN105087526B | 公开(公告)日: | 2018-08-10 |
发明(设计)人: | 阮灵伟;董琦;施泓;徐洵 | 申请(专利权)人: | 国家海洋局第三海洋研究所 |
主分类号: | C12N9/42 | 分类号: | C12N9/42;C12N15/56 |
代理公司: | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人: | 马应森 |
地址: | 361005 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | flammeovirga sp sjp92 琼胶酶 及其 制备 方法 | ||
Flammeovirga sp.SJP92β‑琼胶酶及其制备方法,涉及Flammeovirga sp.SJP92β‑琼胶酶基因的核苷酸序列以及其所编码的氨基酸序列。提取Flammeovirga sp.SJP92的总DNA,通过PCR扩增获得了琼胶酶编码基因核苷酸序列,并鉴定了β‑琼胶酶基因agaB。通过pET‑28sumo质粒构建了重组原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度高、活力好,为该蛋白的实际应用提供了基础。通过同源重组表达β‑琼胶酶,可克服分离纯化过程复杂繁琐、产量低等不足,为该蛋白能广泛应用于生物、食品、医药、农业等领域奠定基础。
技术领域
本发明涉及琼胶酶,尤其是涉及Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶及其制备方法。
背景技术
琼胶由琼脂糖(agarose)和琼脂胶(agaropeetin)组成。琼脂糖是由1,3-O-β-D-半乳吡喃糖和1,4-O-3,6-内醚-α-L-半乳吡喃糖反复交替组成的链状分子;琼脂胶结构比较复杂,在交联的半乳糖链上含有D-半乳糖、3,6-半乳糖苷、半乳糖醛酸和硫酸基、丙酮酸等取代基团。
根据琼胶酶水解琼脂糖方式不同,可将其分为α-琼胶酶和β-琼胶酶。α-琼胶酶裂解琼脂糖的α-l,3糖苷键,生成以β-D-半乳糖为非还原性末端和以3,6-内醚-α-L-半乳糖为还原性末端的琼寡糖(agarooligosaccharides)系列。而β-琼胶酶则裂解琼脂糖的β-1,4-糖苷键,生成以β-D-半乳糖为还原性末端和以3,6-内醚-α-L-半乳糖为非还原性末端的的新琼寡糖(neoagarooligosaccharides)系列。目前所发现的琼胶酶中,大多数都是β-琼胶酶,只有少数几种是α-琼胶酶。
琼胶酶在科学研究、食品、医疗保健等领域具有广泛的应用价值。在分子生物学实验中,利用琼胶酶从琼脂糖凝胶中回收DNA和RNA,已经被证明是最好的方法之一。由于琼胶是某些红藻细胞壁的重要组成成分,因此琼胶酶可以用作海藻酶解的工具酶,来获得DNA、蛋白质、单细胞或原生质体,用于海藻细胞生理生化的研究,以及用于进行细胞间的融合和目的基因的导入。通过测定琼胶酶水解某些海藻多糖的水解产物结构可用于推测海藻多糖的结构。由于酶降解具有专一性、高效性、降解条件和过程易于控制、无副反应等优点,因此该方法应用较广泛。酶能够降解多糖,得到相对分子质量比较均一的降解物,对多糖的主体结构不会产生影响,因此还可利用琼胶酶水解藻类获得海藻单细胞作为饲料用于海水动物的养殖。此外,琼胶酶还可用于琼脂寡糖的制备。琼脂寡糖在食品生产中有广泛的应用,如作为天然防腐剂、淀粉老化抑制剂、高甜度甜味剂的填充剂及分散剂、功能性食品基料、抗氧化剂等。在药物应用方面,琼脂等海藻多糖一定分子量的降解产物具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫等作用。近来在日用化工领域又发现了琼脂寡糖的一些新用途,日本以琼脂寡糖为添加剂生产的化妆品对皮肤的保湿效果良好,对头发也有很好的调理作用。
发明内容
本发明的第一目的是提供Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶;
本发明的第二目的是提供Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶基因agaB的核苷酸序列;
本发明的第三目的是提供Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶蛋白的氨基酸序列;
本发明的第四目的是提供Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶的制备方法。
本发明的第五目的是提供Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶AgaB的生物学活性。
所述Flammeovirga sp.SJP92β-琼胶酶已于2014年11月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮编:100101,保藏中心登记入册编号:CGMCC No.10071。
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