[发明专利]诱导普通小球藻ZF藻株高效积累花生四烯酸的方法

说明书

本发明提供一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累花生四烯酸的方法，其特征在于采用如下步骤：1)制备藻液：在23℃±2℃、光强1900±100lx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BG11培养基培养普通小球藻ZF藻株细胞28天至对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次1倍浓度的BG11营养盐；2)积累花生四烯酸：取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂6‑BA，植物生长调节剂6‑BA在藻液中的浓度为0.1±0.005mg/L，于23℃±2℃进行诱导处理14±1天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现花生四烯酸在藻液中的积累。本发明简单易行、成本低廉，能在短期内显著积累花生四烯酸含量。

技术领域

本发明提供一种诱导普通小球藻ZF藻株高效积累花生四烯酸的方法，属于生物技术领域。

背景技术

小球藻(Chlorella)是一种常见的水生单细胞藻类，是绿藻小球藻科中的一个重要属，生态分布广泛，在海水和淡水中均有分布，目前包括大约10个种。小球藻细胞内含有丰富的蛋白质(干重的50％)、必需氨基酸、多糖、脂类(脂肪酸积累的结果)、叶绿素、胡萝卜素、和维生素等等，在保健食品、水产养殖(饲料添加剂)、化妆品、医药等领域内应用广泛，国内外市场供不应求。与美国、日本、以色列等国家相比，我国的小球藻工业化大规模培养水平相对滞后。普通小球藻ZF藻株是一种球形单细胞淡水藻类，通常生长在富营养化的水体中，但在人工培养条件下能大量生长繁殖。营养盐(氮、磷等)、光照、pH值、温度、微量元素(铁、锰、硒等)、碳酸氢铵、等因素均能影响小球藻生长。

花生四烯酸(AA)，化学名称为5，8，11，14—二十碳四烯酸，其含有20个碳原子，4个不饱和键，属于n-6系列的长链多不饱和脂肪酸(PUF A)，简记为20：4(n-6)。人们从研究爱斯基摩人心血管疾病发病率低的现象中了解到，二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸等长链不饱和脂肪酸(PUFA)可以防止胆固醇在动脉血管壁上沉积，预防心血管疾病的发生，从此开始了对PUFA与疾病以及亚健康人群之间关系的研究，AA的生理活性也逐渐被人们所认识。AA广泛分布于动物的中性脂肪中，它是牛乳脂、猪脂肪、牛脂肪、血液、磷脂、肝磷脂和脑磷脂中的一种成分，但含量较少，同时也是肾上腺磷脂混合脂肪酸的一种主要成分。此外，油料种子中也含有AA，它是花生油的主要成分。有研究报道，Sohlek等人在几种苔藓和蕨类植物中检测到了AA。在日本的沙丁鱼中，也分析得到了AA。真菌中，AA主要分布在原始的几个纲中，例如卵菌纲(Oomycetes)、丝壶菌纲(Hyphochytrimycete)、壶菌纲(Hytridiomycetes)和被孢霉属(Mortierella)。传统制备AA主要是从深海鱼油中提取，其含量一般只有0.2％(W/W)，因受到季节、产地等因素的影响,鱼油中AA的含量不稳定并且比较匮乏，故价格十分昂贵。在我国，有关AA产品的相关报道很少,有待于大力的研究开发。微藻是进行植物生长调节剂诱导的优良材料，其结构简单、生命周期短、光敏性强、代谢过程极易受环境影响，也容易被检测。