[发明专利]一种生产嗜酸木聚糖酶的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生产嗜酸木聚糖酶的方法。

背景技术

木聚糖酶（1，4-β－D－xylanase;EC3.2.1.8）是一种重要的工业用酶，在造纸工业、食品、饲料和能源等领域中具有重要的应用价值。不同的应用领域对木聚糖酶的酶学特性有不同的要求，比如，在造纸工业中，木聚糖酶主要作为纸浆漂白助剂，用于提高纸张的百度和强度，减少传统氯化物漂白剂的应用，为了不破坏纸浆中的纤维素，一般要求采用没有纤维素酶活性的碱性木聚糖酶。在饲料工业上，木聚糖酶主要作为饲料添加剂，用于降解木聚糖，提高动物对饲料的利用率，一般选择在酸性条件下有高活性，同时能耐蛋白酶降解的木聚糖酶。自然界中，不同来源的木聚糖酶的酶活特性有很大的差异，有着各自特异的最适反应pH和最适作用温度。多数木聚糖酶最适反应pH值在4.0～6.0，容易被蛋白酶降解，因此研究开发出在pH2-3环境中具有高酶活性，同时能耐受蛋白酶降解的木聚糖酶在饲料工业上具有重要的应用价值。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种生产嗜酸木聚糖酶的方法的技术方案。

所述的一种生产嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

将青霉菌在固体PDA平板上30oC培养5-7天，收集孢子，制成每毫升含有10⁷孢子的孢子悬液，按2%的接种量接入发酵培养基中，于30oC，200rpm摇床中培养，得到含有嗜酸木聚糖酶的培养液。

所述的一种生产嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于所述的发酵培养基含有：KH₂PO₄3.0g/L，NaNO₃3.0g/L，CaCl₂0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，FeSO₄·7H₂O7.5mg/L，MnSO₄·H₂O2.5mg/L，ZnSO₄2.0mg/L，CoCl₂3.0mg/L。

上述的一种生产嗜酸木聚糖酶的方法，设计合理，通过该方法得到的木聚糖酶活力达到150U/ml,纤维素酶活力达到3.5U/ml，其在在动物饲料、食品工业中具有重要的应用价值。

具体实施方式

以下将结合具体实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

实施例1

将青霉菌在固体PDA平板上30oC培养5-7天，收集孢子，制成每毫升含有10⁷孢子的孢子悬液，按2%的接种量接入发酵培养基中，于30oC，200rpm摇床中培养，每隔24小时取样1ml，离心取上清用于测定酶活。

该发酵培养基含有：KH₂PO₄3.0g/L，NaNO₃3.0g/L，CaCl₂0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，FeSO₄·7H₂O7.5mg/L,MnSO₄·H₂O2.5mg/L,ZnSO₄2.0mg/L，CoCl₂3.0mg/L。

木聚糖酶的活性检测方法简述如下：

测定底物：1.0%山毛榉木木聚糖（Beechwoodxylan，Sigma）；

标准曲线：分别吸取0mM，1mM，2mM，3mM，4mM和5mM木糖标准液，加入等体积DNS，沸水中沸腾5分钟，取出冷却后，于波长540nm测定吸光值，根据获得的吸光值绘制标准曲线。

木聚糖酶活测定：取1.5ml离心管，加入100μl木聚糖底物溶液，95μlpH缓冲液，5μl稀释10倍的酶粗提液，55℃保温10min，加入200μlDNS，摇匀后沸水浴5min，冷却后于波长540nm测定吸光值，以0min反应时间为空白对照。

酶活性定义为：在55℃,相应pH条件下，1min水解木聚糖底物产生出相当于1μmol葡萄糖的还原糖量为一个酶活力单位。酶活测定时选用的底物为山毛榉木木聚糖（Beechwoodxylan，Sigma），利用二硝基水杨酸（DNS）方法检测还原糖。

测定结果显示，在pH3.0的情况下HN培养液上清酶活为150U／ml。