[发明专利]一种提取动物组织核酸的方法

说明书

一种提取动物组织核酸的方法，包括以下步骤：(1)将动物组织样品、核酸提取液加入到鼓泡床容器中，所述核酸提取液含有能够吸附核酸的磁性微球；所述鼓泡床容器底部设置有微孔板和气体入口；(2)从所述气体入口向鼓泡床容器中通入氮气或惰性气体，使动物组织样品与核酸提取液充分混合、反应，分离出的核酸被磁性微球吸附。根据本发明的提取动物组织核酸的方法，能够对动物组织进行快速解离并高效分离提纯核酸，能够广泛应用到动物疫病检测领域。

技术领域

本发明涉及一种提取动物组织核酸的方法。

背景技术

动物疾病对畜牧业以及人类的食品安全都有着重要的影响，采用分子生物学方法对动物组织进行病原菌诊断能够获得最准确的结果。关键步骤是要从动物组织样品中提取细菌或病毒的DNA。能获取不同种类的细菌DNA或不同种类病毒的DNA，以及基因组的完整性、纯度和浓度，是从动物组织中提取DNA用于动物病原菌诊断的首要目标。

现有的DNA提取过程中常常有污染，并且步骤繁琐，提取过程时间较长。如高氯酸钠法、SDS法和尿素法等提取方法，但这些方法需要样本量较大，并且苯酚类等有机物容易在DNA溶液中残留，特别是在后续的PCR扩增过程中会干扰扩增过程，影响扩增结果，使得该方法的应用受到一定的限制。

磁性微球在外加磁力的作用下，可快速分离纯化核酸DNA，因安全并易于实现自动化而迅速发展。磁性微球核酸提取方法是指以超顺磁性的磁性微球在高盐、低PH溶液中吸附核酸，而在低盐溶液中将核酸从磁性微球表面脱离的原理进行核酸提取的方法。

现有的磁性微球通常是由四氧化三铁或三氧化二铁等磁芯与二氧化硅等材料复合而成的具有一定磁性的球形微粒。中国发明专利(CN1217352)公开了一种二氧化硅包覆四氧化三铁的磁性微球的制备方法，其采用酸化法在四氧化三铁表面沉积二氧化硅。而加入的酸性物质(HCl)会在一定程度上与磁芯四氧化三铁发生反应，从而会对磁性微球的磁性产生不确定性影响，导致产品质量不稳定。

此外，磁性微球在核酸提取液中容易产生团聚和沉淀现象，从而严重影响核酸的提取效率。现有技术中通常采用机械搅拌或超声振荡来克服这一问题，但机械搅拌或超声振荡又会对磁性微球的结构和吸附能力产生一定的破坏作用。

发明内容

本发明的目的是针对上述背景技术中存在的某些和某个问题，提供一种提取动物组织核酸的方法。

根据本发明的提取动物组织核酸的方法，包括以下步骤：

(1)将动物组织样品、核酸提取液加入到鼓泡床容器中，所述核酸提取液含有能够吸附核酸的磁性微球；所述鼓泡床容器底部设置有微孔板和气体入口；

(2)从所述气体入口向鼓泡床容器中通入氮气或惰性气体，使动物组织样品与核酸提取液充分混合、反应，分离出的核酸被磁性微球吸附。

在本发明的具体实施例中，动物组织样品既可以是为心脏、肝脏、肺脏、脾脏或肾脏的匀浆液；也可以是全血、血浆、血清或动物分泌物。

在本发明的优选实施例中，所述核酸提取液含有磁性微球、异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸，其中异硫氰酸酯的浓度为3.5-5M,盐酸胍的浓度为1.5-3M,碘化钠的浓度为1.2-2.5M,EDTA的浓度为15-30mM,十二烷基氨基酸的浓度为60-100mM；磁性微球的质量浓度为10-15％。

在本发明的优选实施例中，磁性微球由纳米级磁芯和多孔碳化硅包覆层组成。

在本发明的优选实施例中，其中磁性微球的粒径为10-50μm。

在本发明的优选实施例中，其中微孔板的孔径为3-10μm。

在本发明的优选实施例中，所述鼓泡床容器为直径为15-30mm的圆柱形容器。