[发明专利]一种动物组织核酸提取液的制备方法

权利要求书

1.一种动物组织核酸提取液的制备方法，包括以下步骤：

(一)磁性微球的制备

(1)将聚碳硅烷固体溶解到有机苯类溶剂中，形成乳液；将纳米级磁性粉体加入到含有表面活性剂的有机醇类溶剂中，搅拌均匀形成悬浮液；将悬浮液加入到乳液中，搅拌均匀，得到混合液；其中聚碳硅烷与磁性粉体的质量比为2-5:1；

(2)将混合液通过微孔膜滴入到含有交联剂的温水溶液中，水温保持在60-80℃；使得混合液中聚碳硅烷交联固化在磁性粉体表面；利用减压蒸馏手段将水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球；其中交联剂选自N,N-亚甲基双丙烯酰胺或氨丙啶，交联剂与水的质量比为0.05-0.2:1；

(3)将固体微球在500-1000℃下、氮气或惰性气体保护下进行保温1-2小时，其中升温速率为0.1-2℃/min，聚碳硅烷裂解后形成表面多孔的固体微球；

(4)将热处理后的固体微球通过磁分离手段进行筛选，筛选出合格的成品磁性微球；

(二)磁性微球的活化

将(一)中制得的成品磁性微球与催化剂、氨基试剂以1:1-20：5-30的质量比混合，保持pH值为10-13，温度为50-80℃下，搅拌反应5-10小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球；其中催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾，氨基试剂选自氨基苯甲脒或氨基苯基硼酸；

(三)提取液的配制

将步骤(二)中活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为3.5-5M,盐酸胍的浓度为1.5-3M,碘化钠的浓度为1.2-2.5M,EDTA的浓度为15-30mM,十二烷基氨基酸的浓度为60-100mM；磁性微球的质量浓度为10-15％。

2.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，有机苯类溶剂选自甲苯、二甲苯和二乙烯基苯中的一种或几种组合。

3.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，其中有机醇类溶剂选自乙醇或乙二醇。

4.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，其中表面活性剂选自二辛基琥珀酸磺酸钠、十烷基硫酸钠、溴化十烷基三甲基铵或溴化十烷基铵。

5.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，其中纳米级磁性粉体的粒径为1nm-30nm。

6.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，其中磁性粉体为铁、钴、镍或它们的合金。

7.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(1)中，其中磁性粉体为Fe₃O₄。

8.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(2)中，其中微孔膜的孔径为1-50μm。

9.根据权利要求1所述的动物组织核酸提取液的制备方法，其中步骤(一)的(2)中，其中微孔膜的孔径为10-30μm。