[发明专利]一种高纯度放线菌素D的提纯方法

说明书

本发明提供了一种高纯度放线菌素D的提纯方法，其操作方法如下：以链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物为原料，将粗提物用强极性溶剂配成样品溶液，上反相柱吸附，层析柱预先用20％强极性溶剂的水溶液3倍柱体积平衡，用强极性溶剂的水溶液作解析液进行梯度洗脱或恒定浓度洗脱。

技术领域

本发明具体涉及一种高纯度放线菌素D的提纯方法。

背景技术

放线菌素D(Actinomycin D，AMD，别名更生霉素)最早就是从放线菌S.melanochromogenes No.1779或者S.Parvullus中分离得到的，属于放线菌素家族的一员，这类化合物由多种链霉菌属的微生物产生。该类化合物结构中往往都含有一个能使之显红色或者黄色的杂三环发色团Actinocin：2－氨基－4，6－二甲基吩嗯嗪－(3)－氧－1，9－二羧酸，差别在于其上连接的环状五肽结构因放线菌素的种类不同而不同。

AMD己广泛用于恶性肿瘤的临床治疗，是较为理想的抗肿瘤药物，也是国家基本医疗保险药物品种之一。结合手术治疗和放射治疗，AMD对肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、霍奇金病及绒毛膜癌的治疗有效，对睾丸肿瘤也有一定疗效，尤其是对儿童肾母细胞瘤(Wilm’s tumor)有很好的治疗效果，总体治疗率可以达到70～80％，对于没有明显肿瘤转移的病患治愈率可以上升到80～90％。此外，还常与其他药物联合用于肿瘤的治疗与研究。放线菌素D与氨甲喋呤联合用药治疗妊娠期绒膜癌，治愈率可达到70～90％，并对已转移的肿瘤也有很好的抑制效果。放线菌素D与氨甲喋呤、长春新碱以及苯基丁酸氮芥联合用药可以有效治疗睾丸肿瘤，放线菌素D与博来霉素等药物联合治疗卵巢癌可使五年生存率达到87.5％。

目前AMD研究主要集中在其作用机理和化学结构的改造。作用机理研究主要为AMD与核酸的作用，认为其发挥抗菌、抗肿瘤、抗病毒的主要机理是干扰核酸的合成。此外，研究发现AMD还能通过诱导细胞分化、诱导细胞凋亡，抑制一些蛋白酶活性及影响细胞周期等而发挥其抗肿瘤活性。对AMD的化学改造可以分为两类，一类是在吩嗯嗪酮环上的改造，另一类则是环五肽的结构改造。研究发现AMD的抗瘤谱比较有限，并且具有较大毒性从而严重影响了其使用剂量和使用范围。因此，为了满足临床的需要，迫切需要生产高纯度的AMD。

AMD的分离提纯方法描述见于CN200610019395、CN201110366034等。CN200610019395记载的更新霉素(即放线菌素D和放线菌素S3混合物)通过结晶进一步提纯方法；CN201110366034描述方法HPLC方法只能生产实验室用低数量的AMD，以及纯AMD的回收率低。其它主要采用正相层析如硅胶或氧化铝柱层析法同样存在分离周期长、回收率低、分离效果差等问题。因此，在技术上需要有生产AMD以及分离和纯化AMD的改进方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种高纯度放线菌素D的提纯方法。

本发明是这样实现的：一种高纯度放线菌素D的提纯方法，其操作方法如下：以链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物为原料，将粗提物用强极性溶剂配成样品溶液，上反相柱吸附，层析柱预先用20％(V/V)强极性溶剂的水溶液3倍柱体积平衡，用强极性溶剂的水溶液作解析液进行梯度洗脱或恒定浓度洗脱；所述反相柱填料为纳米微球材料。

优选地，所述纳米微球材料为以聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物为基质的PS40-300；或以聚二乙烯基苯/丙烯酸酯聚合物为基质的PSN40-300。

优选地，所述反相柱填料的粒径为40um，孔径为

优选地，所述反相柱填料的用量为放线菌素D粗提物重量的80-120倍体积。

优选地，所述强极性溶剂为甲醇、乙醇。

优选地，所述解析液的浓度为40％-80％(V/V)。