[发明专利]一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法

权利要求书

1.一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)构建融合蛋白，该融合蛋白包括依次相连的ELP[KV₈F-40]、连接肽、肠激酶酶切识别位点和活性多肽decapeptide-12，其中ELP[KV₈F-40]包括如SEQID01所示的氨基酸序列，连接肽包括如SEQID02所示的氨基酸序列，肠激酶酶切识别位点包括如SEQID03所示的氨基酸序列，活性多肽decapeptide-12包括如SEQID04所示的氨基酸序列；

(2)将上述融合蛋白的氨基酸序列根据大肠杆菌的密码子的偏爱性，合成表达融合蛋白的基因序列；

(3)将上述基因序列拼接到大肠杆菌表达载体上，导入大肠杆菌进行诱导表达，破碎菌体、离心，得上清液；

(4)在一定的盐离子浓度和缓冲溶液条件下，通过控制步骤(3)所得的上清液的温度使融合蛋白发生相变而聚集，再通过离心纯化得到融合蛋白，即所述具有美白功效的活性多肽。

2.如权利要求1所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述大肠杆菌为E·coliBL21或BLR。

3.如权利要求1或2所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(3)为：将上述基因序列拼接到大肠杆菌表达载体pET-22b上，导入大肠杆菌进行IPTG诱导表达后收集菌体，用预冷的pH7.3的PBS重悬菌体，然后置冰浴中超声破碎，再0～4℃，12000～13000rpm离心10～15min，得上清液。

4.如权利要求3所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中超声破碎后的离心的条件为：4℃，12000rpm，10min。

5.如权利要求3所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(4)包括：

a、按1:1的体积比向上清液中加入NaCO₃溶液，37℃～45℃恒温水浴15～20min，10000～12000rpm离心5～8min，弃上清，收集沉淀；

b、向上述沉淀中加入1mLpH7.3的PBS，使沉淀充分溶解，冰浴15～20min，再0～4℃，10000～12000r/min离心5～8min，收集上清，即得所述具有美白功效的活性多肽。

6.如权利要求5所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤a为：按1:1的体积比向上清液中加入NaCO₃溶液，37℃～45℃恒温水浴15min，10000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀。

7.如权利要求5所述的一种具有美白功效的活性多肽的生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤b为：向上述沉淀中加入1mLpH7.3的PBS，使沉淀充分溶解，冰浴15min，再4℃，10000r/min离心5min，收集上清，即得所述具有美白功效的活性多肽。