[发明专利]polyA侨联的双茎环DNA电化学传感器及其制备和应用

权利要求书

1.一种基于polyA侨联的双茎环DNA电化学传感器，其特征在于包括：电极和捕获探针DNA，电极采用金电极，捕获探针DNA为含有两个茎环的单链DNA，DNA链的3’端修饰亚甲基蓝，DNA链的5’端修饰二茂铁，两个茎环的中间以polyA相连接，通过polyA与金电极的作用使捕获探针DNA以双发夹结构立于金电极表面。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于：所述polyA含有12个碱基。

3.一种根据权利要求1或2所述电化学传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)金电极的处理：在硼氢化钠溶液中浸泡电极1h，冲洗后依次用0.3μm和0.05μm氧化铝粉末打磨电极，在超纯水中超声2分钟；

(2)捕获探针的组装：将捕获探针DNA分散在CaCl₂-TE缓冲溶液中,滴加捕获探针DNA溶液到已经处理好电极上，盖上电极帽，在恒温箱中培育,取出电极用冲洗缓冲液对电极进行冲洗。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述硼氢化钠溶液的浓度为1mol/L，其制备方法为硼氢化钠溶解在质量比1：1的超纯水和乙醇中。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述CaCl₂-TE缓冲溶液的pH值为7.4，采用以下步骤制备：配制10mmol/L的Tris-base，用0.2mol/L HCl调节pH至7.4后，加入1mmol/L EDTA和1mol/L CaCl₂混合即得CaCl₂-TE缓冲溶液。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述冲洗缓冲液为10mmol/L Tris-HCl，采用以下步骤制备：配制10mmol/L的Tris-base，用0.2mol/L HCl调节pH至7.4即得冲洗缓冲液。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2的培育时间为1～12h。

8.一种根据权利要求1或2所述电化学传感器用于检测特定序列的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)根据目标物选择茎环DNA制备双茎环DNA电化学传感器，在-0.6～0.6V范围内，对培育冲洗好电极进行方波伏安法测定；

(2)用MCH对电极进行封闭1小时后，清洗并用氮气吹干；将用pH值为7.0的NaCl-TE培育的目标DNA滴加到电极表面，室温培育1h，同样条件进行电化学检测。