[发明专利]检测叶酸靶蛋白用检测体系及其检测方法

权利要求书

1.一种检测叶酸靶蛋白用检测体系，其特征在于每100μL该传感体系含有70uLMops-Buffer、25μL4×ExoIIIBuffer、1uL10uM的Probe链和1uL10uM该链的互补cDNA链，在90℃～95℃的恒温下加热5～10min，冷却至室温；所述的Probe链为：

5'-folate-NH-GCGTCACATGGCTAGGGTAAAGTCTACGGCCGGGTAGA-3'；

所述的互补cDNA链为：5'-CTAGCCATGTGACGC-3'。

2.根据权利要求1所述的检测叶酸靶蛋白用检测体系，其特征在于所述的Mops-Buffer为：20mMMOPS、30mMNaCl，pH7.5。

3.根据权利要求1所述的检测叶酸靶蛋白用检测体系，其特征在于所述的4×ExoIIIBuffer为：20mMTris-HCl、3mMMgCl₂、50mMNaCl，pH7.4。

4.一种叶酸靶蛋白的检测方法，采用根据权利要求1～3中任一项所述的检测叶酸靶蛋白用检测体系，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.在每100μL上述检测体系中，加入1μL待测溶液，于37℃温度下恒温1.5h，然后，加入0.1unit/μLExoIII在37℃下酶切30min，升至80℃灭活10min；

b.在每100μL步骤a所得溶液中加入1μL、100mM的抗坏血酸，震动混匀后加入50μL、200μM的无水硫酸铜到混合液，室温反应15min，以在双链DNA表面形成铜纳米颗粒；

c.取磁性氧化石墨烯的二甲基亚砜溶液加入到步骤c所得溶液体系中，使该溶液体系中氧化石墨烯的浓度为100μg/mL，震摇20min，使步骤b所得双链DNA吸附在磁性氧化石墨烯上，之后将该吸附有双链DNA的磁性氧化石墨烯与反应溶液分离；

d.将步骤c所得磁性氧化石墨烯浸没在0.5M的硝酸中，然后将该磁性氧化石墨烯从溶液中分离；

e.在步骤d所得溶液与浓度为1mg/mL的邻苯二胺OPD溶液按1：1.5～2的体积比混合，80℃恒温反应10min，然后利用电化学工作站并用差分脉冲伏安法测定分析电活性物质的信号变化，实现了叶酸受体在溶液中的检测。