[发明专利]用于卵巢癌的荧光定量PCR试剂盒及检测方法和用途

权利要求书

1.一种用于卵巢癌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括用于ETV4、FOXM1和LSR特异性mRNA反转录的反转录PCR反应液、荧光定量PCR反应液、标准品和引物序列；

其中，所述的引物序列包括用于ETV4特异性扩增的引物序列，用于FOXM1特异性扩增的引物序列，以及用于LSR特异性扩增的引物序列；

所述的用于ETV4特异性扩增的引物序列包括引物1和引物2，其中引物1的序列为：5’-ggatacttggaccagcaagt-3’，引物2的序列为：5’-gacttgatggcgatttgt-3’；

用于FOXM1特异性扩增的引物序列包括引物3和引物4，其中引物3的序列为：5’-caaacagcggaacaaact-3’，引物4的序列为：5’-tctgcttgattagactcct-3’；

用于LSR特异性扩增的引物序列包括引物5和引物6，引物5的序列为：5’-atatctgaaagcatgccct-3’，引物6的序列为：5’-tggaagaggatcaccacgt-3’；

所述的引物1的浓度为：0.5～1μM，引物2的浓度为0.5～1μM；

所述的引物3的浓度为0.5～1μM，引物4的浓度为0.5～1μM；

所述的引物5的浓度为0.5～1μM，引物6的浓度为0.5～1μM；

所述的标准品包括ETV4的质粒，FOXM1的质粒，以及LSR的质粒；

质粒中含有的ETV4基因的扩增序列，序列如下：

质粒中含有的FOXM1基因的扩增序列，序列如下：

质粒中含有的LSR基因的扩增序列，序列如下：

其中，序列后面的数字代表扩增序列中核苷酸在整个基因全长中的位置。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的反转录PCR反应液包括反转录酶、核酸酶抑制剂、oligodT引物、dNTPs和缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的反转录酶的浓度为30～80U/μl，核酸酶抑制剂的浓度为3～8U/μl，oligodT引物的浓度为50～80μM，dNTPs的浓度为1～3mM，所述的缓冲液包括200～300mM的三羟甲基氨基甲烷、300～500mM的氯化钾、10～30mM的氯化镁和30～80mM的二硫苏糖醇。

4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光定量PCR反应液包括荧光染料、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的DNA聚合酶的浓度为50～80U/ml，dNTPs的浓度为0.4～1mM，所述缓冲液包括80～120mM的三羟甲基氨基甲烷，100～200mM的氯化钾和8～15mM的氯化镁。

6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括无核酸酶的水。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括无核酸酶的水。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括无核酸酶的水。