[发明专利]一种适合板栗花粉培养的液体培养基及培养方法在审
申请号: | 201510614412.9 | 申请日: | 2015-09-24 |
公开(公告)号: | CN105154385A | 公开(公告)日: | 2015-12-16 |
发明(设计)人: | 房克凤;张伟伟;秦岭;谢彭雪;张卿;杨柳;曹庆芹 | 申请(专利权)人: | 北京农学院 |
主分类号: | C12N5/04 | 分类号: | C12N5/04 |
代理公司: | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人: | 牟彩萍 |
地址: | 102206 北京市昌平区回*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 适合 板栗 花粉 培养 液体 培养基 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种适合板栗花粉培养的液体培养基及培养方法。
背景技术
花粉是具有独特结构和生物学功能的微小生命有机体,一般由2-5个细胞组成,由于其结构简单,易于离体操作,因此是研究植物细胞生长发育、物质转运、信号传递等生命过程的理想实验体系。同时花粉萌发和花粉管生长又是完成种子植物有性生殖的重要环节,这一过程是植物生殖生物学研究领域的重点。因此,建立合适的离体培养方法非常重要。
板栗是我国重要的木本粮食,雄、雌花比例非常高。大量花粉消耗了树体许多营养。有关花粉的研究至关重要。目前现存的有关板栗花粉培养的方法均为固体培养,其收集比较困难,为后续的细胞学、分子生物学及代谢组学的研究带来不便。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷,提供了一种液体培养基及相应的培养方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现:
一种适合板栗花粉培养的液体培养基,以双蒸水为溶剂,每100g溶剂中含有13-18g的蔗糖、0.005-0.01g硼酸、0.02-0.06g氯化钙。
作为优选方案,上述的适合板栗花粉培养的液体培养基,每100g溶剂中含有15g的蔗糖、0.005g硼酸、0.04g氯化钙。
优选的,所述培养基pH值为5.6-6.2。
进一步优选的,所述培养基pH值为6。
一种板栗花粉培养方法,将收集板栗花粉置于上述的花粉液体培养基中振荡培黑暗培养,即可。
优选的,收集板栗花粉时,用15%灭过菌的蔗糖水将花粉从花序上涮下来,并离心收集,并将收集到的花粉用无菌蔗糖水涮洗3遍以上。
优选的,黑暗培养时在30-38℃的摇床中振荡下培养,转速150-180转/分钟,湿度保持在85%以上,培养33-38小时。
进一步优选的,黑暗培养时,将花粉液体培养基分装于10mL离心管中。
优选的,培养时温度为34℃。
优选的,转速160转/分钟。
优选的,黑暗培养36小时。
优选的,所述板栗花粉为板栗成熟花粉或低温冷藏的板栗花粉。
本发明的有益效果:
本发明提供的培养基提高了板栗花粉离体萌发率,增加了花粉管长度,收集方便,可以广泛的应用于进一步相关科研试验中。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明,应当理解,此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基,以双蒸水为溶剂,包括的组分为15%的蔗糖和0.005%硼酸和0.04%氯化钙,培养基pH值为6.0;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉,于花粉离体萌发液体培养基中,在34℃摇床中振荡培养,转速160转/分钟,湿度保持在85%以上,进行黑暗培养36小时。
实施例2:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基,以双蒸水为溶剂,包括的组分为13%的蔗糖和0.006%硼酸和0.02%氯化钙,培养基pH值为6.2;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉,于花粉离体萌发液体培养基中,在38℃摇床中振荡培养,转速150转/分钟,湿度保持在85%以上,进行黑暗培养33小时。
实施例3:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基,以双蒸水为溶剂,包括的组分为18%的蔗糖和0.01%硼酸和0.06%氯化钙,培养基pH值为5.6;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉,于花粉离体萌发液体培养基中,在30℃摇床中振荡培养,转速180转/分钟,湿度保持在85%以上,进行黑暗培养38小时。
实施例4:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基,以双蒸水为溶剂,包括的组分为15%的蔗糖和0.01%硼酸和0.03%氯化钙,培养基pH值为5.6;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉,于花粉离体萌发液体培养基中,在30℃摇床中振荡培养,转速180转/分钟,湿度保持在85%以上,进行黑暗培养38小时。
实施例5:
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