[发明专利]一种蜈蚣兰组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养研究领域，具体涉及一种蜈蚣兰组培快繁方法。

背景技术

蜈蚣兰（Cleiso-stama scolopendrifolium (Makino) Garay）属兰科隔距兰属，是国家Ⅱ级保护植物，主要分布于我国中东部的河南、浙江、福建、重庆等13个省、直辖市，附生于海拔1000米的山涧两侧的岩石或树皮上。蜈蚣兰全株可入药，有清热解毒、润肺止咳和利水通淋等功效，具有广泛的药用价值，主要用于治疗气管炎、胆囊炎、咽喉炎、急性扁桃体炎、慢性副鼻窦炎、小儿惊风等症，在湖北武当山地区被民间作为还阳草入药，认为对某些疾病患者有起死回生的作用。因其分布区域较窄、生境独特、种群较小，易受人类活动影响等原因，影响了该物种资源的开发和利用，组织培养技术为蜈蚣兰种质资源的保存和开发开辟了新途径。由于蜈蚣兰植株内具有内生真菌，在组织培养初代培养时内生菌丝迅速蔓延，严重影响组培快繁体系的建立，至今没有蜈蚣兰组培快繁方法的研究报道。

发明内容

本发明提供一种蜈蚣兰组培快繁方法，目的在于解决现有技术存在的问题，降低内生菌的污染率，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体采集及消毒：春季剪取长2～3cm带茎尖的蜈蚣兰茎段，剥去叶片，用清水冲洗1～2h，在超净工作台上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5～6次；

（2）芽诱导培养：将经步骤（1）消毒后的茎段切下茎尖，接种至芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，培养25～35d得到丛生芽，培养条件为：光照10～12 h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；

（3）增殖培养：将步骤（2）芽诱导培养得到的丛生芽切取单芽，接种至增殖培养基进行增殖培养，培养30～40d后切取生长健壮的单芽，备用，培养条件为：光照12～16 h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；

（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖培养中获得的单芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养，培养15～20d后得到无根苗，培养条件为：光照12～16 h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；

（5）生根培养：将步骤（4）壮苗培养中获得的无根苗接种至生根培养基进行生根培养，培养25～35d得到生根的试管苗，培养条件为：光照10～12 h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；

（6）炼苗移栽：将步骤（5）生根培养得到的试管苗，挑选苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度25±2℃、空气相对湿度75～80%、光强2000～2500Lx的环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后取出组培苗，洗净培养基，栽至温度16～26℃，空气相对湿度80％～85％，光强2000～2500Lx环境下的苗床中，苗床基质由泥炭土、珍珠岩、松树皮按体积比3：1：1混合而成。

前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（2）所述的芽诱导培养基成分为：MS+6-BA3.0～5.0mg/L+IAA0.5～0.8mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH为5.5～6.5。

前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（3）所述的增殖培养基成分为MS+6-BA4.0～6.0mg/L+NAA0.6～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0 g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH5.5～6.5。

前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（4）所述的壮苗培养基成分为MS+GA₃1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L +卡拉胶8.0～10.0g/L + AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+椰汁15%，pH5.5～6.5。

前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（5）所述的生根培养基成分为：MS+IBA1.0～3.0 mg/L+蔗糖25～30g/L +卡拉胶8.0～10.0 g/L +50%多菌灵1～1.5g/L+香蕉泥10%，pH5.5～6.5。