[发明专利]引物组合及确定生物样品来源的方法

说明书

本发明提出了一种引物组合及其一种确定生物样品来源的方法，所述引物组合包括：第一核酸分子和第二核酸分子，第一核酸分子和第二核酸分子被设置为适于扩增狐狸、貉和貂的特征性DNA区段。本发明所提出引物组合和方法能够快速、准确、灵敏地检测出狐狸、貉和貂物种或狐狸、貉和貂源性成分。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的，本发明涉及一种引物组合，一种试剂盒及其一种确定生物样品来源的方法。

背景技术

随着人们对生活质量的越发重视，食品安全问题得到各国政府的广泛重视。尤其是动物饲料、肉质品等跟民生息息相关的产业，更加得到消费者的高度关注。目前，对畜禽动物制品的源性成分检测已经涉及到食品工业、饲料贸易以及餐饮业等领域。成为保障食品及饲料安全的常规检测手段，承担着进出口防疫检查、肉制品市场监督的重要任务。是否能够快速、高灵敏地检测到饲料及食品中添加的违禁物质(如添加剂、非饲料类肉粉等)，将直接关系到国家的饲料及食品安全保障，进而影响人们的健康和生活。

在目前已开发的畜禽动物源成分分子生物学检测方法中，以分子标记技术应用最为广泛和成熟。常用的分子标记有基因组DNA标记、RNA标记、线粒体DNA标记以及蛋白质标记。其中，由于线粒体DNA遗传特性相对独立，又具备细胞拷贝数高、无组织特异性、不易降解等特点。被广泛用于动物源性成分鉴定的标记位点。目前，国内外对鸡、鸭、鱼、羊、牛、狗、猫、猪、驴、马等物种的源性成分鉴定已各有报道。

然而，能够快速、灵敏地检测畜禽类动物源性成分的方法仍有待进一步开发。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

狐狸、貉、貂，由于其肉经济价值低，许多商贩或养殖户将狐狸、貉、貂肉充当羊肉等，以肉粉制品卖入食品或饲料市场谋取利益。但由于此类制品往往在肉眼及感官上很难区分，从而极易造成饲料及食品市场的混乱，增加狐狸、貉、貂疾病流行的风险以及人畜共患疾病的可能。

申请公布号为CN102643912A的专利公开了一种检测水貂源性成分的扩增引物，属于特种经济动物水貂源性成分的检测。该方法是针对貂物种的特异检测方法，只能检测单一物种，从而限制了检测通量，增加了检测操作的繁琐性。

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提出一种能够同时检测狐狸、貉、貂的引物组合，该引物组合是针对狐、貉、貂的通用特异引物，能够同时对三种物种进行检测，提高了检测通量和检测效率。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种引物组合。根据本发明的实施例，该引物组合包括：第一核酸分子和第二核酸分子，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子被设置为适于扩增狐狸、貉和貂的特征性DNA区段。根据本发明的实施例，该引物组合是针对狐、貉、貂的通用特异引物，能够同时对狐狸、貉和貂物种进行检测，检测通量和检测效率显著提高。

根据本发明的实施例，上述引物组合还可以具有下列附加技术特征的至少之一：

根据本发明的实施例，上述引物组合进一步包括：第三核酸分子和第四核酸分子，所述第三核酸分子和所述第四核酸分子被设置为适于扩增狐狸、貉和貂的所述特征性DNA区段的一部分。根据本发明的实施例，第三核酸分子和第四核酸分子是针对狐、貉、貂的通用特异荧光PCR引物，能够同时对狐狸、貉和貂物种进行荧光定量PCR检测，由于荧光定量PCR具有灵敏度高的特点，检测结果既可以作为对第一核酸分子和第二核酸分子检测结果的再确定，又可以检测出第一核酸分子和第二核酸分子未筛选出的微量狐狸、貉和貂的源性成分，同时也可以通过荧光定量PCR检测结果对样品DNA的起始拷贝数进行定量。根据本发明的实施例，应用第三核酸分子和第四核酸分子进一步提高了检测结果的准确性，进一步提高了检测效率。

根据本发明的实施例，所述特征性DNA区段具有SEQ ID NO：1～3之一所示的核苷酸序列。