[发明专利]制备重组L-谷氨酸生产菌株的方法、由该方法制备的菌株及其使用方法

权利要求书

1.一种制备重组L-谷氨酸生产菌株的方法，该方法包括：

使L-谷氨酸生产菌株中的lpdA基因以及任选的odhA基因和/或sucB基因的表达水平相对于野生型菌株而言下降至少10％，从而得到所述重组L-谷氨酸生产菌株，

其中，所述L-谷氨酸生产菌株为野生型谷氨酸棒杆菌；

其中，将lpdA基因以及任选的odhA基因和/或sucB基因的野生型启动子替换为受温度调控的温度敏感型启动子，以使所述基因的表达水平下降，

其中，所述受温度调控的温度敏感型启动子选自中国仓鼠卵巢细胞S100a6基因启动子和大肠杆菌dsrAp(Δ4)启动子；所述受温度调控的温度敏感型启动子使得所述基因在高于37℃的培养条件下培养时的表达水平下降至使用野生型启动子时的基因表达水平的1％～50％；所述中国仓鼠卵巢细胞S100a6基因启动子的序列如SEQ ID NO：15所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述野生型谷氨酸棒杆菌为保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心、保藏号为CICC20213的谷氨酸棒杆菌野生型菌株ATCC13032；或保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心、保藏号为CICC20935的谷氨酸棒杆菌野生型菌株S9114。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，利用如SEQ ID NO：1所示的同源重组片段使lpdA基因的表达水平下降。

4.由权利要求1-3中任一项所述的方法制备的重组L-谷氨酸生产菌株，所述重组L-谷氨酸生产菌株中lpdA基因的表达水平相对于野生型菌株而言下降了至少10％。

5.根据权利要求4所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，所述重组L-谷氨酸生产菌株中odhA基因和/或sucB基因的表达水平相对于野生型菌株而言也下降了至少10％。

6.根据权利要求4或5所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，相比野生型菌株中lpdA基因的表达水平，所述重组L-谷氨酸生产菌株中lpdA基因的表达水平下降了至少80％。

7.根据权利要求6所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，相比野生型菌株中lpdA基因的表达水平，所述重组L-谷氨酸生产菌株中lpdA基因的表达水平下降了至少90％。

8.根据权利要求6所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，相比野生型菌株中lpdA基因的表达水平，所述重组L-谷氨酸生产菌株中lpdA基因的表达水平下降了至少95％。

9.根据权利要求6所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，相比野生型菌株中lpdA基因的表达水平，所述重组L-谷氨酸生产菌株中无可检测水平的lpdA基因表达。

10.根据权利要求4或5所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，所述重组L-谷氨酸生产菌株中odhA基因和/或sucB基因的表达水平下降了至少75％。

11.根据权利要求10所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，所述重组L-谷氨酸生产菌株中odhA基因和/或sucB基因的表达水平下降了至少85％。

12.根据权利要求10所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，所述重组L-谷氨酸生产菌株中odhA基因和/或sucB基因的表达水平下降了至少90％。

13.根据权利要求10所述的重组L-谷氨酸生产菌株，其中，所述重组L-谷氨酸生产菌株中无可检测水平的odhA基因表达和sucB基因表达。

14.使用根据权利要求4-13中任一项所述的重组L-谷氨酸生产菌株发酵生产L-谷氨酸的方法。