[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病精制卵黄抗体生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊病精制卵黄抗体生产方法。

背景技术

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG类抗体，因此称其为卵黄免疫球蛋白IgG(yolkantibody)，简称为IgY。

当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体，IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG，单个卵黄(约15ml)中卵黄抗体含量可达200mg左右。再加之从卵黄中提取抗体较从动物血清中提取抗体简便，因此卵黄抗体具有明显的技术优势。

此外，卵黄抗体在多种环境中有较好的稳定性。在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性，90℃处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在PH<4时，仅有少量卵黄抗体失去活性。在pH4～12范围内，卵黄抗体的活性几乎不受影响，在pH>12时，卵黄抗体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的特性，即使经过5次冻融，其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月，4℃保存可达5年以上，活性仅下降5％左右。

由于具备上述优越的生物学、理化特性，因此卵黄抗体的制备与应用受到了越来越多的关注。然而由于现有技术的卵黄抗体生产工艺存在缺陷因此极大的影响了产品品质，例如一些粗制抗体产品不仅抗体效价难以保证，而且通常会污染禽呼肠孤病毒、禽淋巴白血病病毒、网状内皮增生因子、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体等外源性致病原。在注射抗体预防或者治疗疾病时，极有可能造成垂直传播病原或其他一些细菌、病毒的扩散甚至疾病的爆发，带来严重的经济损失。此外，由于这些粗制抗体的制造者往往试图通过添加大剂量的甲醛、青、链霉素等措施来延长其产品的保质期，增加所谓的使用“安全性”，但结果往往是造成更大的应激和严重的药物残留。而且粗制抗体中含有大量的脂蛋白及卵磷脂等大分子物质，这些物质没有任何治疗作用且体积大，粘稠度高，注射困难且难以吸收，注射后对机体的应激大，易造成过敏反应，是外源性致热原。注射后易造成注射部位局部组织出血、肿胀、坏死，坏死的组织会导致机体发热，而发热会造成机体神经调节、体液调节等功能的紊乱，从而导致发病群体采食量减少，抵抗力下降，继发其他疾病。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种鸡传染性法氏囊病精制卵黄抗体生产方法，以解决现有技术的卵黄抗体生产方法所制备的卵黄抗体效价较低的技术问题。

本发明解决的另一技术问题是现有技术的卵黄抗体生产方法会存在杂质残留。

本发明解决的再一技术问题是现有技术的卵黄抗体生产方法可能混入外源性致病微生物。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种鸡传染性法氏囊病精制卵黄抗体生产方法，包括以下步骤：

1)利用鸡传染性法氏囊病疫苗免疫鸡；

2)取高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后破碎；

3)以1:(2～3)(w/w)的比例向步骤2)破碎后的卵黄中加入温度为50～56℃、pH为4.8～5.2的醋酸盐缓冲液，搅拌25～35min，得到混合液；

4)向步骤3)所述混合液中加入3～5％(v/v)的正辛酸，搅拌30～180min；

5)过滤去除固形物，即得到卵黄抗体。

优选的，步骤1)中所述鸡是120日龄的海兰褐鸡。

优选的，步骤1)中所述免疫是先利用鸡传染性法氏囊病活疫苗B87株免疫鸡1次，而后再利用鸡传染性法氏囊病油乳剂灭活疫苗免疫2次。在此基础上可以进一步执行以下优选：利用鸡传染性法氏囊病活疫苗B87株免疫鸡1次的疫苗用量为6～8羽份/只；每次利用鸡传染性法氏囊病油乳剂灭活疫苗免疫鸡的疫苗用量为2～5羽份/只；每相邻两次免疫的时间间隔为14d。

优选的，步骤2)中卵黄膜和系带是利用60目尼龙筛过滤去除的。

优选的，步骤2)中所述破碎是利用胶体磨实现的。

优选的，步骤3)所述醋酸盐缓冲液是由以下方法制备的：每1000mL纯化水中溶解0.886g乙酸钠和2.82ml冰乙酸，而后利用4％(w/w)浓度的NaOH调节pH。

优选的，步骤5)中所述过滤是利用丙纶750B滤布实现的。