[发明专利]一种利用鸭血制取抗菌肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种利用鸭血制取抗菌肽的方法。

背景技术

抗菌肽(antibacterialpeptide，ABP)是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性高、安全高效等诸多优点，食物源蛋白抗菌肽的制备成为生物领域的研究热点之一。国内外关于鸭源抗菌肽的研究，主要针对鸭小肠中的抗菌肽，而血中抗菌肽的提取及抗菌活性研究在国内外却很少有报道。目前，我国鸭的饲养量很大，屠宰鸭的下脚料鸭血很多，对其进行抗菌肽的提取和研究，是对资源的利用和再开发，是很有必要的。

发明内容

针对现有技术领域存在的上述问题，本发明的目的在于，提供一种成本低、效果好的利用鸭血制取抗菌肽的方法，解决目前对鸭血进行抗菌肽的提取和研究较少的问题。

本发明为达到以上目的，是通过这样的技术方案来实现的：提供一种利用鸭血制取抗菌肽的方法，包括以下步骤：

（1）采集新鲜鸭血，以3g／L的柠檬酸钠抗凝，加入同等体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到溶血溶液，于4℃保存备用；

（2）取适量溶血溶液，加入一定量的碱性蛋白酶酶解，搅拌，1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，45-55℃，4-6h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10～15分钟，再迅速冷却至0～30℃以终止酶解反应，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液，4℃冷藏备用；

（3）活性炭用量为酶解液总重的5-30％，温度55℃，搅拌脱色20-30min；再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1～0.2Mpa的工作压力和0～45℃的工作温度下，采用截留分子质量为20kD超滤膜进行超滤处理，以除去大分子蛋白类物质，得超滤酶解液；再将超滤酶解液依次进行真空浓缩、冷冻干燥，得抗菌肽，-20℃保存。

以上所述的一种利用鸭血制取抗菌肽的方法，其特征是：所述步骤（2）中碱性蛋白酶是酶比活力10×10⁴u/g；碱性蛋白酶加酶量是5000U／g。

本发明的一种利用鸭血制取抗菌肽的方法，具有如下优点：

1.本发明所制备的抗菌肽是鸭血经生物酶水解而得，属于天然提取物，具有天然、无毒、无污染、无残留、无副作用、高效抗菌等特点，是一种新型的绿色抗微生物药物。

2.采用本发明方法提取的抗菌肽，对革兰氏阴性及阳性细菌均有高效广谱的杀伤作用，纯化产物的抑菌效果高于6000单位青霉素的抑菌效果，粗提物和纯化物对大肠杆菌均有着较强的抑菌效果。

3.本发明所采用的原料来源广泛，价格低廉，经过本发明的技术转化可以有效的提高鸭血副产物的附加值，对继续促进鸭养殖业的发展有重要的意义。

4.本发明的产品可以作为药品、保健食品、食品、食品添加剂、药物增效剂等，工艺科学合理，操作简单，具有较强的工业实施性。

具体实施方式

实施例1

（1）采集新鲜鸭血10L，以3g／L的柠檬酸钠抗凝，在4℃条件下，在鸭血中加入105L蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到溶血溶液20L。

（2）在溶血溶液，加入100g碱性蛋白酶酶解（酶比活力为10×10⁴u/g），搅拌，1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，50℃，5h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度15分钟，再迅速冷却至0～30℃以终止酶解反应，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液19L。

（3）酶解液中加入活性炭用量3kg，温度55℃，搅拌脱色20-30min；再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1～0.2Mpa的工作压力和0～45℃的工作温度下，采用截留分子质量为20kD超滤膜进行超滤处理，收集超滤透过液18L；再将超滤透过液真空浓缩至9L，进行冷冻干燥，得抗菌肽1.14kg，-20℃保存。

检测结果，所得抗菌肽肽含量为90.2％，色泽白色细腻。

实施例2

（1）采集新鲜鸭血50L，以3g／L的柠檬酸钠抗凝，4℃条件下，在鸭血中加入50L蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到溶血溶液100L。