[发明专利]牡蛎疱疹病毒I型检测引物、方法与应用

权利要求书

1.一种检测牡蛎疱疹病毒1型的PCR引物，其特征在于它包括外引物PFor1、PRev1和内引物PFor2、PRev2；

所述PFor1的序列为5’-ATAGTATCACATTACCACCCG-3’，

所述PRev1的序列为5’-CAATTTGTATGCCTTCAGC-3’；

所述PFor2的序列为5’-GTTCTATACCATACGACCTAC-3’，

所述PRev2的序列为5’-TTGCGTTCCGTGACTTCT-3’。

2.一种快速检测牡蛎疱疹病毒1型的巢氏PCR的试剂盒，其特征在于它包括权利要求1所述的引物组。

3.一种利用权利要求1所述引物快速检测牡蛎疱疹病毒1型的巢氏PCR方法，其特征在于它包括如下步骤：

(1)分离样本DNA

(2)分别以步骤(1)的样本DNA及阴性对照为模板，权利要求1所述的外引物组为引物进行第一轮PCR扩增；再分别以第一轮PCR的扩增产物及阳性对照为模板，权利要求1所述内引物组为引物进行第二轮PCR扩增；

(3)将第二轮PCR扩增产物进行电泳，根据电泳扩增条带情况判断样本是否感染牡蛎疱疹病毒1型。

4.根据权利要求3所述的一种快速检测牡蛎疱疹病毒1型的巢氏PCR方法，其特征在于所述外引物组PCR反应体系：所述外引物组PCR反应体系：25μL反应体系中1μL样品DNA、2.5μL的10×PCR反应缓冲液含：20mMTris-HCl,100mMKCl,3mMMgCl₂、2μL浓度为2.5mM的dNTPs、0.5μL浓度为25μM的PFor1、0.5μL浓度为25μM的Prev1、0.5μL浓度为5U/μL的TaqDNA聚合酶、18μL的ddH₂O；PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec、52℃退火45sec、72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸10min。

5.根据权利要求3所述的一种快速检测牡蛎疱疹病毒1型的巢氏PCR方法，其特征在于所述内引物组PCR反应体系：25μL反应体系中1μL外引物的扩增产物、2.5μL的10×PCR反应缓冲液含：20mMTris-HCl,100mMKCl,3mMMgCl₂、2μL浓度为2.5mM的dNTPs、0.5μL浓度为25μM的PFOR2、0.5μL浓度为25μM的PREV2、0.5μL浓度为5U/μL的TaqDNA聚合酶、18μL的ddH₂O；PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec、55℃退火45sec、72℃延伸45sec，30个循环；最后72℃延伸10min。